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上新啦！西美杰正式推出USP/EP標(biāo)準(zhǔn)品采購(gòu)服務(wù)
西美杰正式推出美國(guó)藥典（USP）和歐洲藥典（EP）標(biāo)準(zhǔn)品采購(gòu)服務(wù)，幫助您節(jié)省繁瑣的下單與進(jìn)口流程，節(jié)約人力與時(shí)間成本，真正實(shí)現(xiàn)降本增效！2025-01-16更多>
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熱烈慶祝西美杰榮獲LGC亞太區(qū)最佳銷售金獎(jiǎng)
2024年9月，在泰國(guó)普吉島舉辦的2024年LGC亞太渠道合作伙伴會(huì)議上，北京西美杰科技有限公司因在2023-2024年度連續(xù)出色的表現(xiàn)，被LGC D&K K...2024-10-24更多>
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西美杰成功舉辦生物制品質(zhì)量控制主題線下研討會(huì)
2024年8月20日-21日，西美杰聯(lián)合Cygnus、舟帆生物，分別在蘇州和上海舉辦了兩場(chǎng)生物制品質(zhì)量控制主題研討會(huì)，研討會(huì)邀請(qǐng)了Cygnus高級(jí)技術(shù)經(jīng)理...2024-08-29更多>
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LIVE WEBINAR | 細(xì)胞基因治療生物工藝中應(yīng)對(duì)大規(guī)模樣本的下游工...
病毒載體技術(shù)的研究不斷深入和發(fā)展，為遺傳物質(zhì)的遞送提供了理想工具，成為目前細(xì)胞治療與基因治療的主要遞送技術(shù)。然而，研究人員在細(xì)胞基因...2024-08-22更多>
boutique精品展示
Cygnus HCPs親和純化抗體申購(gòu)指南為了更好地滿足抗體覆蓋率驗(yàn)證的多樣化需求，Cygnus公司限量提供與HCPs ELISA試劑盒匹配的HCPs親和純化抗體，包括生物素標(biāo)記親和純化抗體、HRP標(biāo)記親和純化抗體等多種類型，抗體查詢請(qǐng)點(diǎn)擊這里。 所有用戶在申購(gòu)HCPs親和純化抗體前，必須按照實(shí)際應(yīng)用需求填寫《Cygnus HCPs親和純化抗體申購(gòu)表》，通過(guò)Cygnus審核后方可獲取報(bào)價(jià)并購(gòu)買。具體申購(gòu)流程如下： 掃碼下方二維碼，即刻填寫《Cygnus HCPs親和純化抗體申購(gòu)表》注意事項(xiàng)：報(bào)價(jià)號(hào)只能使用一次，下單后失效，再次購(gòu)買抗體需要重新填寫申購(gòu)表獲取報(bào)價(jià)，請(qǐng)準(zhǔn)確填寫表中要求的所有信息。如果您有任何疑問(wèn)，歡迎聯(lián)系Cygnus中國(guó)區(qū)總代理北京西美杰科技有限公司。希望以上信息能幫助您順利購(gòu)買到Cygnus Technologies親和純化抗體產(chǎn)品。Cygnus Technologies專注為生物技術(shù)和生物制藥行業(yè)提供產(chǎn)品和分析方法超過(guò)25年，旨在加速研發(fā)階段和提高產(chǎn)品質(zhì)量。Cygnus開發(fā)和生產(chǎn)的生物工藝殘留試劑盒，用于檢測(cè)超過(guò)50種不同表達(dá)系統(tǒng)的特異性雜質(zhì)。Cygnus作為專注于生物技術(shù)應(yīng)用免疫檢測(cè)的高靈敏度分析技術(shù)的專家，其產(chǎn)品和服務(wù)已經(jīng)被全球超過(guò)95%以上生物制藥公司使用，并獲得FDA、NMPA、EMA等監(jiān)管機(jī)構(gòu)的廣泛認(rèn)可。 北京西美杰科技有限公司作為Cygnus在中國(guó)總代理，與國(guó)內(nèi)眾多知名藥企，CRO/CMO企業(yè)建立了長(zhǎng)久穩(wěn)定的合作關(guān)系。多年來(lái)西美杰的產(chǎn)品及服務(wù)幫助許多企業(yè)加速R&D階段，提高藥物質(zhì)量、純度和安全，加速優(yōu)化研發(fā)工藝，減少產(chǎn)品上市時(shí)間，降低QC成本。如您對(duì)上述產(chǎn)品感興趣，歡迎致電西美杰客服熱線400-050-4006或者登陸網(wǎng)站www.fushunwax.com.cn了解更多信息。
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喜大普奔！Pfanstiehl 注射級(jí)L-精氨酸 (A-170) CDE登記號(hào)已激活！
“ 熱烈祝賀Pfanstiehl品牌注射級(jí)精氨酸A-170 CDE注冊(cè)登記號(hào)F20190000412已激活！”Pfanstiehl新年喜訊頻傳，注射級(jí)精氨酸A-170 CDE登記號(hào)F20190000412激活了。Pfanstiehl品牌注射級(jí)精氨酸A-170，秉承一貫高品質(zhì)理念，具有超高純度，超低內(nèi)毒素，超低金屬殘留的特點(diǎn)，單獨(dú)檢測(cè)29種金屬離子，并且新增DNA，RNA，DNA酶，RNA酶和脂肪酶，亞硝酸鹽等多項(xiàng)質(zhì)量指標(biāo)的檢測(cè)，符合多國(guó)藥典規(guī)定（USP, EP, JPE, ChP），可用于生物治療性藥物和疫苗的生產(chǎn)。產(chǎn)品信息： · 產(chǎn)品名稱: L-Arginine, High Purity, Low Endotoxin, Low Metals, USP,EP, JP, ChP (A-170)· 中文名稱：L-精氨酸· 分子式：C6H14N4O2· 分子量：174.20 g / mo· CAS號(hào)：74-79-3· 產(chǎn)品貨號(hào)：A-170產(chǎn)品特點(diǎn)：· 超高純度，超低內(nèi)毒素，超低微生物含量，超低金屬雜質(zhì)殘留· 質(zhì)量指標(biāo)新增DNA，RNA，DNA酶，RNA酶，脂肪酶和亞硝酸鹽檢測(cè)· 符合多國(guó)藥典：USP, EP, JPE, ChP· 符合ICH Q3D標(biāo)準(zhǔn)· 符合GMP標(biāo)準(zhǔn)產(chǎn)品應(yīng)用：· 緩沖液· 降粘 如果您對(duì)Pfanstiehl的注射級(jí)L-精氨酸A-170 感興趣，可聯(lián)系Pfanstiehl中國(guó)區(qū)代理北京西美杰科技有限公司獲得詳細(xì)的產(chǎn)品概況說(shuō)明文件如下。也歡迎聯(lián)系獲取測(cè)試樣品。Pfanstiehl Inc.產(chǎn)品系列如下，歡迎聯(lián)系北京西美杰科技有限公司 獲取100g裝免費(fèi)樣品。 北京西美杰科技有限公司為Pfanstiehl中國(guó)代理，為客戶提供完善的技術(shù)支持與售后服務(wù)。歡迎撥打西美杰客服電話400-050-4006或者登陸網(wǎng)站www.fushunwax.com.cn了解更多信息。 更多>抗體片段捕獲的利器---Fabsorbent? F1P HF親和層析填料
近年來(lái)，抗體和抗體片段在生物大分子治療和診斷領(lǐng)域備受關(guān)注，很多抗體類藥物已經(jīng)步入商業(yè)化生產(chǎn)階段。相較于完整的抗體，抗體片段分子量低，組織滲透性好，少有復(fù)雜的糖基化結(jié)構(gòu)，可以使用多種原核或真核細(xì)胞培養(yǎng)平臺(tái)進(jìn)行表達(dá)，已成為很多生物技術(shù)公司的研究熱點(diǎn)。與完整的抗體不同，很多抗體片段分子結(jié)構(gòu)中沒(méi)有Fc端，無(wú)法用傳統(tǒng)的Protein A親和層析填料進(jìn)行捕獲，而Protein L親和層析填料，由于可以結(jié)合抗體輕鏈的可變區(qū)域，為抗體片段的捕獲提供了可靠的技術(shù)手段。但市面上常見(jiàn)的Protein L親和層析填料穩(wěn)定性普遍較低，填料無(wú)法耐受高濃度堿液的清潔，配基脫落嚴(yán)重，且價(jià)格昂貴，給純化工藝帶來(lái)了極大的挑戰(zhàn)。 FabsorbentTM F1P HF是Astrea Bioseparations公司近年來(lái)推出的親和層析填料，填料基架是粒徑均一的高交聯(lián)瓊脂糖，基架上修飾有化學(xué)合成的小分子配基，可以高效捕獲各種抗體片段分子。相較于Protein L親和層析填料，F(xiàn)absorbentTM F1P HF的結(jié)合范圍更廣泛，填料可以耐受高達(dá)1M NaOH的清潔，其主要優(yōu)勢(shì)特點(diǎn)歸納如下： 結(jié)合范圍廣，既可以結(jié)合kappa型輕鏈，也可以結(jié)合lambda型輕鏈，對(duì)一些非人源性的抗體（如鼠源性、牛源性、羊源性等）也有一定的結(jié)合能力，可廣泛地用于F(ab’)2, Fab, scFv, VL, IgG的捕獲。 小分子化學(xué)合成配基，無(wú)動(dòng)物源性，穩(wěn)定性好，安全性高。 填料可以耐受0.5-1M NaOH的清潔和消毒，清潔效果好，壽命長(zhǎng)。 應(yīng)用案例1：FabsorbentTM F1P HF捕獲F(ab’)2抗體片段 在該測(cè)試案例中，研究人員使用胃蛋白酶將完整的IgG水解為Fc和F(ab’)2片段，并上樣到FabsorbentTM F1P HF層析柱中，工藝參數(shù)如下表所示： 層析柱： CV=10mL 層析填料： FabsorbentTM F1P HF 流速： 250cm/h 平衡液： 25mM Tris-HCl, pH 8.0 洗脫液： 50mM sodium citrate, pH 3.0 清潔： 0.5M NaOH 由圖1的層析圖譜和圖2的SDS-PAGE電泳圖譜可以看出，F(xiàn)absorbentTM F1P HF可以高效捕獲料液中的F(ab’)2片段，經(jīng)洗脫后，得到高純度的F(ab’)2分子，層析前添加的胃蛋白酶可被有效去除。 圖1：FabsorbentTM F1P HF捕獲F(ab’)2的層析圖譜 圖2：SDS-PAGE電泳圖譜（Lane 1是molecular weight marker；Lane 2是IgG標(biāo)準(zhǔn)品；Lane 3是胃蛋白酶水解后料液；Lane 4是流穿和淋洗液；Lane 5是洗脫液。） 應(yīng)用案例2：FabsorbentTM F1P HF捕獲CHO表達(dá)的Fab抗體片段 在該應(yīng)用案例中，研究人員使用CHO細(xì)胞表達(dá)Fab抗體片段，細(xì)胞收獲液經(jīng)澄清后，上樣到FabsorbentTM F1P HF層析柱中，工藝參數(shù)如下表所示： 層析柱： 10mm×5cm，CV=4mL 層析填料： FabsorbentTM F1P HF 流速： 300cm/h，上樣流速50cm/h 平衡液： 50mM sodium phosphate, pH 8.0 上樣： 澄清后的CHO細(xì)胞收獲液（含F(xiàn)ab），pH 8.0 洗脫液（測(cè)試1）： 50mM sodium citrate, pH 3.0 洗脫液（測(cè)試2）： 50mM sodium acetate, pH 4.0 淋洗液（測(cè)試3）： 50mM glycine-NaOH, pH 9.0 洗脫液（測(cè)試3）： 50mM sodium acetate, pH 4.0 清潔： 0.5M NaOH 測(cè)試還研究了不同的洗脫工藝條件，測(cè)試1采用了pH 3.0的等度洗脫方式，測(cè)試2采用了pH 4.0的等度洗脫方式，測(cè)試3先采用pH 9.0的甘氨酸緩沖液進(jìn)行上樣后的淋洗，隨后用pH 4.0的醋酸鹽緩沖液進(jìn)行等度洗脫。 由圖4的SDS-PAGE電泳圖譜可以看出，F(xiàn)absorbentTM F1P HF可以有效捕獲細(xì)胞收獲液中的Fab抗體片段。三種洗脫方式均可以確保大于90%的目標(biāo)Fab純度，且回收率極高。其中，在測(cè)試2的洗脫條件下，F(xiàn)ab純度和回收率最高。在測(cè)試3的條件下，洗脫前使用pH 9.0的甘氨酸緩沖液淋洗能去除少量非特異性結(jié)合的雜質(zhì)蛋白。 圖3：FabsorbentTM F1P HF捕獲Fab的層析圖譜（測(cè)試2） 圖4：SDS-PAGE電泳圖譜（Lane 1是molecular weight marker；Lane 2是純化后的Fab對(duì)照品；Lane 3澄清后的CHO細(xì)胞收獲液；Lane 4是測(cè)試1的流穿液；Lane 5是測(cè)試1 的洗脫液；Lane 6是測(cè)試2的流穿液；Lane 7是測(cè)試2的洗脫液；Lane 8是測(cè)試2的再生液（citrate, pH 3.0）；Lane 9是測(cè)試3的流穿液；Lane 10是測(cè)試3的淋洗液；Lane 11是測(cè)試3的洗脫液。） 應(yīng)用案例3： FabsorbentTM F1P HF捕獲E.coli表達(dá)的VL抗體片段 在該應(yīng)用案例中，研究人員使用E.coli表達(dá)VL抗體片段，經(jīng)細(xì)胞裂解和澄清后，直接上樣到FabsorbentTM F1P HF層析柱中，工藝參數(shù)如下表所示： 層析柱： CV=1mL 層析填料： FabsorbentTM F1P HF 流速： 保留時(shí)間=3min 平衡液： 25mM Tris-HCl, pH 9.0 洗脫液： 50mM sodium citrate, pH 3.0 清潔： 0.5M NaOH 由圖5的層析圖譜和圖6的SDS-PAGE電泳圖譜可以看出，F(xiàn)absorbentTM F1P HF可以有效捕獲復(fù)雜料液中的VL抗體片段，大量雜質(zhì)蛋白在上樣和淋洗過(guò)程中被去除，經(jīng)洗脫后，可以得到純度極高的目標(biāo)分子VL。 圖5：FabsorbentTM F1P HF捕獲VL的層析圖譜 圖6：SDS-PAGE電泳圖譜（Lane 1是molecular weight marker；Lane 2是澄清后的E.coli裂解液；Lane 3是流穿液；Lane 4是淋洗液；Lane 5是洗脫液；Lane 6是清潔液。） FabsorbentTM F1P HF親和層析填料的技術(shù)參數(shù) 配基： 化學(xué)合成的三嗪類配基 基架： 粒徑均一的高交聯(lián)瓊脂糖（PuraBead® 6HF） 平均粒徑： 90±10µm 結(jié)合載量： Human Fab: 20mg/ml adsorbent Human IgG: ≥40mg/ml adsorbent 操作流速： up to 500cm/h pH穩(wěn)定性： 3-13（三個(gè)月以上的長(zhǎng)期測(cè)試數(shù)據(jù)） 清潔/消毒： 0.5-1M NaOH, 25℃ 保存： 20%乙醇，2-30℃ FabsorbentTM F1P HF親和層析填料產(chǎn)品信息 散裝填料 貨號(hào) 產(chǎn)品名稱 規(guī)格 3904-00025 FabsorbentTM F1P HF 25 mL 3904-00100 FabsorbentTM F1P HF 100 mL 3904-00500 FabsorbentTM F1P HF 500 mL 3904-01000 FabsorbentTM F1P HF 1 L 預(yù)裝柱 貨號(hào) 產(chǎn)品名稱 規(guī)格 6632 FabsorbentTM F1P HF Column Kit, 4 x 1 ml 4 x 1 ml預(yù)裝柱 6633 FabsorbentTM F1P HF Column Kit, 4 x 5 ml 4 x 5 ml預(yù)裝柱 2233 FabsorbentTM F1P HF PuraPlate 96孔板 參考資料： S. Kittler et al., Protein L-more than just an affinity ligand, 2021 Brochure: Purify and capture of antibody fragments with a new synthetic ligand affinity adsorbent FabsorbentTM F1P HF, Astrea Bioseparations Technical Note: Fab and F(ab’)2 fragment purification from CHO cell culture supernatant using Fabsorbent? F1P HF, Astrea Bioseparations Technical User Guide: FabsorbentTM F1P HF, Astrea Bioseparations Astrea Bioseparations于1987年孵化自劍橋大學(xué)，擁有超過(guò)30年層析介質(zhì)研發(fā)和生產(chǎn)經(jīng)驗(yàn)，是世界級(jí)層析介質(zhì)產(chǎn)品與服務(wù)供應(yīng)商。目前使用Astrea的產(chǎn)品已有超過(guò)21個(gè)生產(chǎn)工藝通過(guò)了FDA和EMA的批準(zhǔn)。Astrea Bioseparations在全球擁有3個(gè)研發(fā)和生產(chǎn)基地，專注為生物大分子和CGT領(lǐng)域提供行業(yè)領(lǐng)先的層析介質(zhì)和技術(shù)服務(wù)。Astrea Bioseparations推出的基于納米纖維的新型層析技術(shù)，解決了傳統(tǒng)生物分離工具載量低和工藝耗時(shí)問(wèn)題，實(shí)現(xiàn)更快、更環(huán)保、更具成本效益的純化過(guò)程，完全符合當(dāng)今生物治療創(chuàng)新的需求。 西美杰是Astrea Bioseparations中國(guó)區(qū)代理，為用戶提供完善的技術(shù)支持與售后服務(wù)。歡迎隨時(shí)撥打西美杰客服熱線400-050-4006或登錄網(wǎng)站www.fushunwax.com.cn了解更多信息。 更多>新年首發(fā) I Pfanstiehl 重磅推出注射級(jí)甘氨酸Glycine (G-140)
甘氨酸是結(jié)構(gòu)最簡(jiǎn)單的氨基酸，學(xué)名氨基乙酸，分子式為C2H5NO2。常溫下是白色結(jié)晶或結(jié)晶性粉末，味甜。它極易溶于水，在乙醇、丙酮這些有機(jī)溶劑里也能溶解，展現(xiàn)出較好的親水性。甘氨酸分子內(nèi)既有酸性羧基（-COOH），又有堿性氨基（-NH2)，這使其既能和酸反應(yīng)，也能與堿反應(yīng)，在不同的pH環(huán)境呈現(xiàn)出多樣的離子化狀態(tài)，緩沖能力出色。因其特點(diǎn)，甘氨酸在醫(yī)藥輔料制劑中應(yīng)用廣泛，并具有諸多優(yōu)勢(shì)，如以下應(yīng)用：緩沖劑： 甘氨酸分子的兩性離子特點(diǎn)，使其在不同的pH環(huán)境能穩(wěn)定溶液酸堿度，讓制劑環(huán)境維持穩(wěn)定，保障藥物活性成分不受酸堿性變動(dòng)影響，這對(duì)生物制品、酶類藥物等對(duì)pH敏感的藥物制劑極為關(guān)鍵。增溶劑：甘氨酸親水性良好，能夠和難溶性藥物分子相互作用，降低藥物分子之間的聚集，讓藥物以分子或離子態(tài)分散，增加其在溶劑里的溶解度，有助于難溶藥物制成溶液劑。 穩(wěn)定劑：在蛋白類、多肽類藥物制劑里，甘氨酸能夠優(yōu)先與周圍水分子結(jié)合，減少藥物分子的水化層干擾，防止藥物因聚集、變性而失活，能很好的維持這類生物大分子藥物的穩(wěn)定性。但甘氨酸在應(yīng)用于醫(yī)藥輔料時(shí)也有其局限性，如在應(yīng)用于凍干制劑時(shí)，容易發(fā)生結(jié)晶形態(tài)異常，在與其他輔料一同使用時(shí)，會(huì)改變整個(gè)凍干體系的塌陷溫度；在被用于調(diào)節(jié)注射劑滲透壓時(shí)，使用不當(dāng)會(huì)容易導(dǎo)致滲透壓過(guò)高等。尤其是，甘氨酸作為藥用輔料對(duì)純度要求極高，甘氨酸原料中的雜質(zhì)，哪怕是微量存在，進(jìn)入人體后也能引發(fā)免疫反應(yīng)或毒副作用。提純甘氨酸達(dá)到注射級(jí)標(biāo)準(zhǔn)，技術(shù)難度大且成本高，所以一定程度限制了它在藥用制劑中的大規(guī)模應(yīng)用。Pfanstiehl秉承一貫高品質(zhì)理念，為滿足全球生物制藥行業(yè)對(duì)于高品質(zhì)甘氨酸的需求，隆重推出注射級(jí)甘氨酸Glycine (G-140), 具有超高純度，超低內(nèi)毒素，超低金屬殘留的特點(diǎn)，單獨(dú)檢測(cè)29種金屬離子，并且新增DNA，RNA，DNA酶，RNA酶和脂肪酶，亞硝酸鹽等多項(xiàng)質(zhì)量指標(biāo)的檢測(cè)，符合多國(guó)藥典規(guī)定（USP, EP, BP, JPE, ChP），可用于生物治療性藥物和疫苗的生產(chǎn)。 產(chǎn)品信息： · 產(chǎn)品名稱:Glycine, High Purity, Low Endotoxin, Low Metals, USP, EP, BP, JPE, ChP (G-140)· 中文名稱：甘氨酸· 分子式：C2H5NO2· 分子量：75.07 g / mol· CAS號(hào)：56-40-6· 產(chǎn)品貨號(hào)：G-140產(chǎn)品特點(diǎn)：· 超高純度，超低內(nèi)毒素，超低微生物含量，超低金屬雜質(zhì)殘留· 質(zhì)量指標(biāo)新增DNA，RNA，DNA酶，RNA酶，脂肪酶和亞硝酸鹽檢測(cè)· 符合多國(guó)藥典：USP, EP, BP, JPE, ChP· 符合ICH Q3D標(biāo)準(zhǔn)· 符合GMP標(biāo)準(zhǔn)· 美國(guó)DMF和中國(guó)CDE藥用輔料登記工作進(jìn)行中產(chǎn)品應(yīng)用：· 緩沖劑· 穩(wěn)定劑· 增溶劑如果您對(duì)Pfanstiehl注射級(jí)別Glycine G-140感興趣，歡迎聯(lián)系Pfanstiehl 中國(guó)區(qū)代理北京西美杰科技有限公司獲得如下詳細(xì)的產(chǎn)品概況說(shuō)明文件和測(cè)試樣品。 Pfanstiehl Inc.其他產(chǎn)品系列如下，歡迎聯(lián)系北京西美杰獲取100g裝免費(fèi)樣品。北京西美杰科技有限公司為Pfanstiehl中國(guó)代理，為客戶提供完善的技術(shù)支持與售后服務(wù)。歡迎撥打西美杰客服電話400-050-4006或者登陸網(wǎng)站www.fushunwax.com.cn了解更多信息。 更多>【技術(shù)在線】HCP ELISA方法驗(yàn)證——加標(biāo)回收（Spike & Recovery）
前言 在ELISA試劑盒的使用過(guò)程中，確保結(jié)果的準(zhǔn)確性至關(guān)重要。為了有效識(shí)別樣品配方與試劑盒組分之間的兼容性，加標(biāo)回收這一關(guān)鍵驗(yàn)證試驗(yàn)顯得尤為重要。它不僅是評(píng)估ELISA試劑盒準(zhǔn)確性的重要工具，也是滿足法規(guī)和藥典（如ICH或FDA指南等）對(duì)商品化ELISA試劑盒方法學(xué)驗(yàn)證要求的可靠方式。 什么是加標(biāo)回收？ 加標(biāo)回收就是將已知量的標(biāo)準(zhǔn)品添加到樣品中（“加標(biāo)”，spiking），通過(guò)對(duì)比加入前后的檢測(cè)結(jié)果，評(píng)估“回收”（recovery）測(cè)量值的準(zhǔn)確性。這一過(guò)程可以揭示樣品及其緩沖液中某些成分是否會(huì)干擾檢測(cè)結(jié)果。目前，影響ELISA試劑盒定量結(jié)果的常見(jiàn)因素包括極端pH、去污劑、有機(jī)溶劑、高蛋白質(zhì)濃度以及高鹽濃度等。因此，在進(jìn)行加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)之前，確保排除這些干擾因素是至關(guān)重要的。 如何判定干擾因素？ 樣品或緩沖液中的某些成分可能會(huì)影響HCP或其他雜質(zhì)的檢測(cè)與定量，導(dǎo)致回收結(jié)果的高估或低估，由此說(shuō)明樣品中存在干擾因素。同樣，上游收獲物和過(guò)程樣品的基質(zhì)中也可能存在疑似干擾 ELISA 檢測(cè)的成分。 在有干擾的情況下，實(shí)驗(yàn)結(jié)果通常表現(xiàn)為回收率偏低。但是，如果藥物本身或其他基質(zhì)組分與捕獲或檢測(cè)抗體有相互作用，則可能表現(xiàn)為回收率偏高。 此外，非特異性干擾，如試劑與孔板的結(jié)合，也會(huì)導(dǎo)致OD值偏高。通過(guò)合理控制實(shí)驗(yàn)流程，可以找出具體的干擾因素。 何時(shí)進(jìn)行加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)？ 在進(jìn)行加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)前，需要先完成樣品的稀釋線性分析，只有明確了最低需求稀釋倍數(shù)（MRD），加標(biāo)回收分析才有意義。（稀釋線性分析的詳細(xì)內(nèi)容請(qǐng)參考《HCP ELISA方法驗(yàn)證——稀釋線性dilution linearity》） （Tips：每種類型的樣品基質(zhì)都需要進(jìn)行加標(biāo)回收分析。同時(shí)如果實(shí)驗(yàn)步驟進(jìn)行了優(yōu)化，則需要重復(fù)此實(shí)驗(yàn)以確保檢測(cè)的有效性。） 如何執(zhí)行加標(biāo)回收分析？ 樣品制備： 加標(biāo)樣品：可以設(shè)定3-4個(gè)不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品加入到不同類型待檢樣品中，制備成加標(biāo)樣品，需要注意的是加標(biāo)樣品的濃度需在滿足MRD的條件下進(jìn)行分析，也就是最低加標(biāo)濃度不能低于LOQ的兩倍。 對(duì)照樣品：按相同體積比在每種待檢樣品中加入樣品稀釋液，制備成對(duì)照樣品，用于測(cè)定樣品本底的HCP濃度。 實(shí)驗(yàn)過(guò)程： 使用ELISA試劑盒同時(shí)檢測(cè)加標(biāo)樣品和對(duì)照樣品，每個(gè)樣品最好做3個(gè)重復(fù)孔，以計(jì)算均值。 結(jié)果分析： 回收率計(jì)算公式： 如下表案例所示，我們使用大腸桿菌HCP ELISA試劑盒（F410）分別檢測(cè)加標(biāo)樣品（100 ng/mL標(biāo)準(zhǔn)品與樣品按1:4體積比混合，加標(biāo)濃度為20 ng/mL）和對(duì)照樣品（樣品稀釋液與樣品按1:4體積比混合），通過(guò)測(cè)得的HCP濃度計(jì)算出回收率為95%。依據(jù)ICH、FDA及EMA等分析方法驗(yàn)證指南要求，HCP加標(biāo)回收率的可接受范圍應(yīng)在75%~125%。 為了方便您快速了解如何用4倍稀釋法制備加標(biāo)樣品和ELISA布板的詳細(xì)步驟，請(qǐng)觀看以下操作視頻。加標(biāo)回收問(wèn)題排查 如果加標(biāo)回收數(shù)據(jù)顯示出明顯的產(chǎn)物或基質(zhì)干擾，您可能需要通過(guò)進(jìn)一步稀釋樣品或置換緩沖液等方式來(lái)獲取準(zhǔn)確的檢測(cè)結(jié)果。理想情況下，請(qǐng)選擇與標(biāo)準(zhǔn)品相同的稀釋液進(jìn)行樣品稀釋，這樣可以最大限度地減少偏差。在某些情況下，調(diào)整檢測(cè)方法也許能提高特定樣品類型的準(zhǔn)確性，但請(qǐng)務(wù)必謹(jǐn)慎操作，以免影響結(jié)果的可靠性。 為了全力支持客戶進(jìn)行加標(biāo)回收驗(yàn)證及方法學(xué)開發(fā)，Cygnus為每款ELISA試劑盒都配備了相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)品，詳情請(qǐng)查閱下表。貨號(hào)品名規(guī)格適用的試劑盒貨號(hào)F553H-1CHOHCP Antigen Concentrate, 3G400 µlF550-1F1048XCHO Lysate HCP AntigenConcentrate200 uLF1045F1023XE.coli HCP 2G Antigen Concentrate200 uLF1020F1063XBL21(DE3) HCP AntigenConcentrate200 µlF1060F653SXHEK293 Antigen Concentrate250 µlF650SF1043XSf9 HCP 3G AntigenConcentrate200 µlF1040F1018XP.pastoris HCP Antigen Concentrate200 µlF1015F143UP. pastoris AntigenConcentrate200 µlF140/F640F978XVeroCell 2G HCP Antigen Concentrate400 µlF975F1058XPER.C6 HCP 2G AntigenConcentrate200 µlF1055F1033XSP2/0HCP 2G Antigen Concentrate200 uLF1030F998XPG13 HCP AntigenConcentrate200 uLF995F493GL.lactis HCP Antigen Concentrate 200 µlF490F233GA549 Antigen Concentrate200 µlF230F813XHeLaAntigen Concentrate1 mlF810F803XMDCK Antigen Concentrate1 mlF800F513GBHKHCP Antigen Concentrate1 mlF510F227CNS/0 Antigen Concentrate1 mlF220F453XP.fluorescens Antigen Concentrate1 mlF450F823XCAP® Antigen Concentrate400 µlF820F1028XC1HCP Antigen Concentrate200 uLF1025F603XProtein A AntigenConcentrate250 µlF600F613XProteinA Antigen Concentrate250 µlF610F403HProtein A AntigenConcentrate200 µlF400F044ProteinA Concentrate200 µlF050/F050HF740-CAmsphere? A3 Ligand Protein A Control250 µlF740F968XAvantorJ.T.Baker® BAKERBOND® PROchievA? Protein A Antigen Concentrate250 µlF965F743XAmsphere? A3 Ligand Protein A Antigen Concentrate300 µlF740F1068XProteinL Antigen Concentrate200 µlF1065F963XEndonucleaseGTP® AntigenConcentrate500 µlF960F031GBSAAntigen Concentrate1 mlF030雖然加標(biāo)回收可以驗(yàn)證HCP ELISA的準(zhǔn)確性，但這只是整體方法學(xué)驗(yàn)證的一部分。完整的驗(yàn)證過(guò)程仍需包括精密度、LOD、LLOQ、ULOQ和HCP抗體覆蓋率等分析。Cygnus針對(duì)每一種檢測(cè)試劑盒均提供相應(yīng)的QS（Qualification Summary）文件，如有需求歡迎點(diǎn)擊這里填寫信息索取，或直接聯(lián)系Cygnus中國(guó)總代理西美杰。如您在使用Cygnus HCP ELISA試劑盒的過(guò)程中遇到任何問(wèn)題，我們的技術(shù)支持團(tuán)隊(duì)將竭誠(chéng)為您提供解決方案和建議。Cygnus Technologies專注為生物技術(shù)和生物制藥行業(yè)提供產(chǎn)品和分析方法超過(guò)25年，旨在加速研發(fā)階段和提高產(chǎn)品質(zhì)量。Cygnus開發(fā)和生產(chǎn)的生物工藝殘留試劑盒，用于檢測(cè)超過(guò)50種不同表達(dá)系統(tǒng)的特異性雜質(zhì)。Cygnus作為專注于生物技術(shù)應(yīng)用免疫檢測(cè)的高靈敏度分析技術(shù)的專家，其產(chǎn)品和服務(wù)已經(jīng)被全球超過(guò)95%以上生物制藥公司使用，并獲得FDA、NMPA、EMA等監(jiān)管機(jī)構(gòu)的廣泛認(rèn)可。北京西美杰科技有限公司作為Cygnus在中國(guó)總代理，與國(guó)內(nèi)眾多知名藥企，CRO/CMO企業(yè)建立了長(zhǎng)久穩(wěn)定的合作關(guān)系。多年來(lái)西美杰的產(chǎn)品及服務(wù)幫助許多企業(yè)加速R&D階段，提高藥物質(zhì)量、純度和安全，加速優(yōu)化研發(fā)工藝，減少產(chǎn)品上市時(shí)間，降低QC成本。如您對(duì)上述產(chǎn)品感興趣，歡迎致電西美杰客服熱線400-050-4006或者登陸網(wǎng)站www.fushunwax.com.cn了解更多信息。 更多>新品上市 | 舟帆生物IEC-HPLC通用流動(dòng)相
前言 離子交換色譜法是一種重要的生物化學(xué)分離技術(shù)，它基于帶電分子與固定相之間的相互作用，廣泛應(yīng)用于蛋白質(zhì)分析，使得通過(guò)酸堿變體推導(dǎo)蛋白相關(guān)降解途徑成為可能，并為相關(guān)的質(zhì)量控制和分子優(yōu)化提供指導(dǎo)數(shù)據(jù)。而在蛋白質(zhì)分析過(guò)程中，離子交換色譜法方法開發(fā)是非常困難的,這受困于每個(gè)蛋白的空間結(jié)構(gòu)和氨基酸排列截然不同，這種跳躍式的變化使得每種蛋白擁有不同的等電點(diǎn)與唾液酸或糖基化程度，這大大增加相關(guān)方法開發(fā)的困難程度，此開發(fā)的關(guān)鍵步驟包括多步：選擇合適的離子交換介質(zhì)、優(yōu)化緩沖體系、確定洗脫條件、調(diào)整流速和柱溫等。這些步驟確保了離子交換色譜法在蛋白質(zhì)分析中的有效性和可靠性，但繁瑣的方法開發(fā)步驟也為試驗(yàn)帶來(lái)極大的時(shí)間成本，間接的增加投入成本，且伴隨著方法開發(fā)失敗的風(fēng)險(xiǎn)，這成為蛋白藥物分析領(lǐng)域迫在眉睫的問(wèn)題。舟帆生物已經(jīng)開發(fā)出關(guān)于離子交換色譜法的通用流動(dòng)相，并取得了令人鼓舞的進(jìn)展。由于樣品中各組分的電荷性質(zhì)、大小、形狀和疏水性等都會(huì)影響離子交換色譜的過(guò)程和結(jié)果，選擇合適的離子交換介質(zhì)和緩沖體系尤為重要。離子強(qiáng)度、pH值、溫度和流速等色譜條件的優(yōu)化需要通過(guò)實(shí)驗(yàn)來(lái)確定，并且離子交換色譜法中離子強(qiáng)度和pH值的微小變化都可能導(dǎo)致分離效果的顯著差異。在日常配制關(guān)于離子交換色譜法流動(dòng)相時(shí)精確控制這些參數(shù)是實(shí)現(xiàn)穩(wěn)定和重復(fù)性分離的關(guān)鍵。然而，在實(shí)際操作中，由于緩沖液的制備和使用過(guò)程可能會(huì)引入誤差，通常導(dǎo)致色譜峰保留時(shí)間的遷移等問(wèn)題。為了解決上述問(wèn)題，舟帆生物自主開發(fā)并優(yōu)化出了一款用于離子交換色譜法的通用流動(dòng)相，該產(chǎn)品綜合考慮了分析成本和時(shí)間效率，在離子色譜方法開發(fā)過(guò)程中兼具了分離效率、分析時(shí)間和成本，提供了一種高效、經(jīng)濟(jì)且通用的離子交換色譜流動(dòng)相的選擇。 材料與方法 儀器、色譜柱 安捷倫1260 高效液相色譜系統(tǒng)ThermoProPac? WCX-10 HPLC 10μm 4×250mm色譜柱樣品 實(shí)驗(yàn)中用到的樣品包括8個(gè)蛋白藥物樣品均來(lái)自合作方浙江大學(xué)藥學(xué)院生物藥制劑與分析團(tuán)隊(duì)。IEC-HPLC參數(shù) 下表列出了使用ZF-LC-0002流動(dòng)相A&B（10×）進(jìn)行IEC-HPLC液相分析的色譜參數(shù)：實(shí)驗(yàn)參數(shù) 將8種蛋白稀釋到1mg/mL,并使用CpB酶酶切，酶切后的樣品10000 rmp/min離心十分鐘取上清液進(jìn)樣檢測(cè)。結(jié)果 見(jiàn)圖1。圖1. 8 種蛋白藥物的IEC-HPLC 色譜圖 結(jié)論 開發(fā)出一種離子交換色譜法通用的流動(dòng)相，在8種蛋白藥物樣品的分析中使用簡(jiǎn)單的洗脫條件即可對(duì)蛋白分子的酸性變體和堿性變體達(dá)到較好的分離，為離子交換色譜法相關(guān)的方法開發(fā)提供了一項(xiàng)優(yōu)異選項(xiàng)，可以為企業(yè)和相關(guān)研究單位大大縮短方法開發(fā)時(shí)間和投入。產(chǎn)品訂購(gòu)信息 貨號(hào) 品名 規(guī)格 ZF-LC-0002IEC-HPLC通用流動(dòng)相（10×）盒（含A液、B液各1000mL) 試用申請(qǐng) IEC-HPLC通用流動(dòng)相試用裝火熱申請(qǐng)中，如您對(duì)上述產(chǎn)品感興趣，請(qǐng)關(guān)注“西美杰微信公眾號(hào)”，發(fā)送關(guān)鍵詞“IEC”，填寫問(wèn)卷即可獲得免費(fèi)試用機(jī)會(huì)，數(shù)量有限，先到先得！品牌介紹 杭州舟帆生物科技有限公司成立于2018年，擁有一支高效的研發(fā)團(tuán)隊(duì)，是一家專注于生物科技領(lǐng)域的公司。公司在蛋白質(zhì)藥品工藝開發(fā)和優(yōu)化、分子診斷等領(lǐng)域擁有豐富的經(jīng)驗(yàn)和技術(shù)優(yōu)勢(shì)。我們的產(chǎn)品包括商業(yè)化毛細(xì)管凝膠電泳檢測(cè)試劑盒、高效液相色譜離子交換檢測(cè)試劑盒、細(xì)胞培養(yǎng)試劑、分子診斷試劑等。這些產(chǎn)品廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)研究、藥物開發(fā)等領(lǐng)域，與眾多知名研究機(jī)構(gòu)和企業(yè)建立了緊密的合作關(guān)系，共同推動(dòng)生物科技的發(fā)展和應(yīng)用。北京西美杰科技有限公司是舟帆生物總代理，始終秉承著專業(yè)、嚴(yán)謹(jǐn)?shù)膽B(tài)度為客戶提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品與服務(wù)。如果您對(duì)上述產(chǎn)品感興趣，歡迎致電北京西美杰客服熱線400-050-4006或登錄網(wǎng)站www.fushunwax.com.cn了解更多產(chǎn)品信息。 更多>抗體親和提取(AAE?)：革新宿主細(xì)胞蛋白(HCPs)分析的新篇章
在生物制藥領(lǐng)域，對(duì)宿主細(xì)胞蛋白(HCPs)的精準(zhǔn)分析與控制是確保藥物安全與有效性的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。各國(guó)法規(guī)都有關(guān)于HCPs的論述，要求必須對(duì)生物藥品進(jìn)行分析和純化，以將宿主細(xì)胞蛋白HCPs降低到可接受的水平。 不同監(jiān)管機(jī)構(gòu)宿主細(xì)胞蛋白(HCPs)法規(guī)要求: 《中國(guó)藥典》(2020版)三部規(guī)定：針對(duì)CHO細(xì)胞，HCPs殘留需要<0.05%(相當(dāng)于小于500ppm)；針對(duì)E.coli，HCP殘留需要<0.01%。 美國(guó)藥典USP<1132>章節(jié)規(guī)定：用一種靈敏度較高的方法檢測(cè)藥品中的HCPs，其含量應(yīng)該低于檢測(cè)限(通常小于100ppm，即1mg總蛋白中HCPs含量應(yīng)小于100ng，也即<0.01%)。 歐洲藥典EP 2.6.34中規(guī)定：在生物制品中，HCP的含量應(yīng)當(dāng)小于0.1%。 國(guó)際人用藥品注冊(cè)技術(shù)協(xié)調(diào)會(huì)(ICH)指南：ICH Q6B指出，需要根據(jù)ICH準(zhǔn)則采用敏感且經(jīng)過(guò)驗(yàn)證的有效方法來(lái)監(jiān)控殘留的HCPs，其殘留量通常要求小于100ppm。ELISA是各國(guó)藥典推薦的在生物制品中檢測(cè)殘留HCPs的方法，可以測(cè)定HCPs的總量。并且ELISA的操作簡(jiǎn)便，是經(jīng)典的免疫學(xué)檢測(cè)方法。但ELISA檢測(cè)HCPs也有方法的局限性，比如不能從ELISA的結(jié)果中知道樣品中有哪些HCPs，或者用于檢測(cè)的抗體與哪些HCPs發(fā)生了免疫反應(yīng)。因此，監(jiān)管部門要求在使用ELISA檢測(cè)過(guò)程中HCPs殘留含量時(shí)，不僅要通過(guò)方法學(xué)驗(yàn)證證明試劑盒的準(zhǔn)確度，精密度，靈敏度等，而且還需要證明使用的HCPs抗體有廣泛的反應(yīng)性，即HCPs抗體覆蓋率。圖 1 HCP ELISA試劑盒檢測(cè)流程 什么時(shí)候做HCPs抗體覆蓋率驗(yàn)證？ 美國(guó)藥典USP<1132>和歐洲藥典EP2.6.34. HOST-CELL PROTEIN ASSAYS將HCPs檢測(cè)方法分為：商業(yè)化試劑盒、產(chǎn)品/工藝專屬性方法和平臺(tái)化方法。并指出在產(chǎn)品開發(fā)的不同階段，推薦采用不同的ELISA試劑盒用于HCPs的檢測(cè)。 USP<1132>提到在沒(méi)有平臺(tái)化方法的情況下可以在臨床前、臨床I期、II期使用商品化試劑盒；在臨床III期/工藝驗(yàn)證及產(chǎn)品上市后，由于商業(yè)化的通用HCP檢測(cè)試劑盒抗體的覆蓋率往往不足等局限性，需要考慮結(jié)合細(xì)胞類型及工藝特異性等因素，使用平臺(tái)化方法或針對(duì)上游工藝開發(fā)的產(chǎn)品/工藝專屬性方法。 而在臨床II期后若是需要繼續(xù)使用商品化試劑盒，就需進(jìn)行HCPs抗體覆蓋率驗(yàn)證來(lái)評(píng)估試劑盒是否可以繼續(xù)用于質(zhì)量監(jiān)控。通常推薦在臨床II期末或者臨床三期前的這個(gè)階段去做覆蓋率驗(yàn)證，此時(shí)生產(chǎn)工藝已經(jīng)固定并且有相對(duì)充足的時(shí)間。 圖2 USP <1132>產(chǎn)品開發(fā)的不同階段HCP檢測(cè)方法的建議 HCP覆蓋率驗(yàn)證的不同技術(shù)路線 傳統(tǒng)的分析方法采用2D Western blot進(jìn)行覆蓋率驗(yàn)證，是基于等電點(diǎn)和分子量不同的原理，蛋白在凝膠上通過(guò)SDS-PAGE方法被分離。其中一張膠被銀染，另一張被轉(zhuǎn)到PVDF膜上，并結(jié)合ELISA試劑盒中的抗體進(jìn)行Western Blotting檢測(cè)。但因其固有的方法學(xué)限制和技術(shù)挑戰(zhàn)，往往難以全面、準(zhǔn)確地評(píng)估多克隆抗體對(duì)HCPs的覆蓋范圍。 2D WB方法限制因素： 負(fù)載能力低 樣品經(jīng)過(guò)前處理會(huì)破壞蛋白天然表位 HCPs結(jié)合到PVDF膜上導(dǎo)致?lián)p失部分檢測(cè)到的抗體信息 難以完全將PAGE凝膠與WB圖片對(duì)齊 特異性差，顯著低估真實(shí)抗體覆蓋率 為了克服這一難題，Cygnus Technologies于2014年創(chuàng)新性地推出了抗體親和提取(Antibody Affinity Extraction，AAE?)技術(shù)，目的是提高細(xì)胞培養(yǎng)收獲液中總HCPs混合物的靈敏度和覆蓋率評(píng)估，并可以檢測(cè)對(duì)下游工藝特異性HCPs的反應(yīng)性，這些通常也是最為關(guān)注的HCPs。與2D-PAGE和2D-WB的靈敏度受負(fù)載能力等限制不同，AAE?的靈敏度可高出100倍以上，因?yàn)樗軌蛱崛『蜐饪s大量樣品。 表 1 AAE與2D-WB覆蓋率技術(shù)路線對(duì)比 AAE 2D-WB 靈敏度 可富集mg級(jí)HCPs 靈敏度高(>95%) 因WB方法的局限性，覆蓋率被低估 靈敏度低(50-70%) 特異性 無(wú)變性處理特異性高(>99.5%) 抗原變性處理后特異性結(jié)合低(50-80%) 覆蓋率 AAE+2D-PAGE 60-90% AAE-MS 70-95% 50-70% 適用性 純化前和純化后均可 只是適合純化前樣品 AAE分析流程首先將多克隆抗體共價(jià)固定在色譜柱上。然后對(duì)色譜柱進(jìn)行條件調(diào)節(jié)，以防止抗體的顯著浸出并極大地減少任何非特異性結(jié)合。原始未變性的HCPs樣品通過(guò)色譜柱與抗體進(jìn)行結(jié)合，隨后用酸洗脫。通過(guò)結(jié)合和洗脫，HCPs樣品再次在柱上循環(huán)，直到?jīng)]有其他HCPs被結(jié)合。所有收集的HCPs洗脫液再匯集、交換緩沖液并濃縮回原始樣品體積，為后續(xù)的分析提供高質(zhì)量的樣本。在收集到HCPs樣本后，可以選擇通過(guò)2D-PAGE+銀染或MS質(zhì)譜進(jìn)行后續(xù)分析。 圖3 USP <1132>產(chǎn)品開發(fā)的不同階段HCP檢測(cè)方法的建議 抗體對(duì)下游HCPs的反應(yīng)性和AAE-MS?的HCPs鑒定 AAE?技術(shù)的優(yōu)勢(shì)不僅在于其高靈敏度，更在于其強(qiáng)大的預(yù)測(cè)能力和廣泛的應(yīng)用前景。通過(guò)AAE-MS?獲得的覆蓋率的結(jié)果更高、更真實(shí)，可以更準(zhǔn)確地預(yù)測(cè)抗HCPs抗體在ELISA中的表現(xiàn)。并且，AAE?與質(zhì)譜聯(lián)用(AAE-MS?)能夠識(shí)別收獲材料中與抗體反應(yīng)的HCPs，并獲得蛋白質(zhì)的分子量和等電點(diǎn)(pI)信息，可以評(píng)估純化過(guò)程中持續(xù)存在的單個(gè)HCPs，并優(yōu)化下游純化工藝。 圖4 F650S HEK2 93抗體覆蓋率驗(yàn)證 值得一提的是，AAE?技術(shù)在檢測(cè)并證明對(duì)單個(gè)下游HCP的反應(yīng)性方面表現(xiàn)出色。更主要的是質(zhì)譜可以對(duì)樣品中是否存在潛在高風(fēng)險(xiǎn)的HCPs做出鑒定并提供這些蛋白的注釋信息。通過(guò)AAE?技術(shù)，能夠更準(zhǔn)確地識(shí)別和量化這些高風(fēng)險(xiǎn)HCPs。這些通過(guò)特定純化過(guò)程持續(xù)存在的高風(fēng)險(xiǎn)HCPs對(duì)于患者安全、藥物功效和穩(wěn)定性至關(guān)重要，無(wú)論是藥物研發(fā)人員還是監(jiān)管人員都能通過(guò)這一技術(shù)清楚地了解工藝中某個(gè)HCP的殘留情況，從而為藥物的研發(fā)和生產(chǎn)提供強(qiáng)有力的支持。 表 2 CHO細(xì)胞高風(fēng)險(xiǎn)HCPs 高風(fēng)險(xiǎn)蛋白（CHO） PRE F550 F550-1 pl MW 78 kDa glucose regulated protein (BiP,HSPA5) N Y Y 5.07 72379.1 Cathepsin B(CTSB) Y Y Y 5.73 35646.9 Cathepsin D Y Y Y 6.54 44110.9 Cathepsin E N N N 4.61 42726.4 Clusterin Y Y Y 5.58 51557.5 Glutathione S transferase P N Y Y 7.64 23638.2 Matrix Metalloproteinase 19 Y Y Y 7.71 58942 Monocyte chemoattractant protein 1(MCP-1) Y Y Y 9.32 15858.4 Peptidyl-prolyl cis-trans isomerase Y Y Y 9.59 23634.4 …. AAE-MS?在藥物原液和過(guò)程樣品監(jiān)控中的應(yīng)用 AAE-MS?也可以對(duì)藥物原液中HCPs富集的同時(shí)去除了大部分原料藥。去除原料藥極大地提高了通過(guò)2D-PAGE和質(zhì)譜分析識(shí)別單個(gè)HCPs的能力，因?yàn)樗幤吠ǔＲ?04-106的倍數(shù)掩蓋HCPs。AAE-MS?是一種更客觀和直接的方法檢測(cè)和鑒定原料藥中任何潛在的HCPs雜質(zhì)以幫助優(yōu)化下游純化工藝。 圖5 AAE對(duì)藥物原液中HCPs的富集 圖6 AAE-MS?對(duì)藥物原液中高風(fēng)險(xiǎn)HCPs的富集和鑒定總之，抗體親和提取(AAE?)技術(shù)以其卓越的性能和廣泛的應(yīng)用前景，正在逐步成為生物制藥領(lǐng)域HCPs分析的新標(biāo)準(zhǔn)。它不僅能夠克服傳統(tǒng)方法的局限性，更在靈敏度、預(yù)測(cè)能力和應(yīng)用深度上實(shí)現(xiàn)了顯著提升。隨著技術(shù)的不斷發(fā)展和完善，相信AAE?將在未來(lái)為更多藥物的研發(fā)和生產(chǎn)貢獻(xiàn)力量，為患者帶來(lái)更加安全、有效的治療方案助力。 支持文獻(xiàn) [1] USP <1132> Residual Host Cell Protein Measurement in Biopharmaceuticals. [2] USP <1132.1> Residual Host Cell Protein Measurement in Biopharmaceuticals by Mass Spectrometry. [3] EP-2.6.34. Host-Cell Protein Assays. [4] Host Cell Protein Analysis: Immunoassays and Orthogonal Characterization By Antibody Affinity Extraction and Mass Spectrometry Methods [5] Antibody Affinity Extraction (AAE?) - A superior alternative to 2D Western blot for determination of polyclonal anti-HCP reactivity. [6] Antibody Affinity Extraction (AAE?) Empowers HCP Identification by Mass Spectrometry. 更多>
一般來(lái)講，偶聯(lián)到二抗上的探針主要有酶（辣根過(guò)氧化酶HRP和堿性磷酸酶AP或其衍生物APAAP，PAP），熒光基團(tuán)（FITC, RRX, TR, PE, Rhodamine）和生物素。選用哪種探針的二抗主要取決于具體的實(shí)驗(yàn)，對(duì)于Western Blot和ELISA，最常用的二抗是酶標(biāo)二抗；而細(xì)胞或組織標(biāo)記實(shí)驗(yàn)（細(xì)胞免疫化學(xué)，組織免疫化學(xué)，流式細(xì)胞術(shù)）中通常使用熒光標(biāo)記的二抗。如果想要更大程度的放大檢測(cè)信號(hào)，可以使Biotin/Avidin檢測(cè)系統(tǒng)。其中熒光素是具有光致熒光特性的染料，熒光染料種類很多，目前常用于熒光標(biāo)記二抗的主要有以下幾種： 異硫氰酸熒光素-Fluorescein Isothiocyanate (FITC) FITC純品為黃色或橙黃色結(jié)晶粉末，易溶于水和酒精溶劑。FITC分子量為389.4，最大吸收光波長(zhǎng)為490～495nm，最大發(fā)射光波長(zhǎng)為520～530nm，呈現(xiàn)明亮的黃綠色熒光。FITC在冷暗干燥處可保存多年，是目前應(yīng)用最廣泛的熒光素。由于FITC是小分子化合物，每一個(gè)抗體可標(biāo)記幾個(gè)FITC分子，IgM通常用小分子的熒光素標(biāo)記，如FITC、Cy3/5、Texas Red等。FITC熒光二抗主要優(yōu)點(diǎn)是人眼對(duì)黃綠色較為敏感，通常切片標(biāo)本中的綠色熒光少于紅色。然而FITC的缺點(diǎn)是淬滅快，因此要和抗淬滅劑一起使用。 四甲基異硫氰酸羅丹明-Tetramethyl Rhodamin Isothiocyanate(TRITC)，Rhodamine Red-X(RRX), Texas Red(TR) 這些羅丹明的衍生物耦聯(lián)基團(tuán)具有不同的吸收波長(zhǎng) (550, 570, 596nm)和最大發(fā)射波長(zhǎng)（570, 590, 620nm）。在使用裝有氪氬燈的激光共聚焦掃描顯微鏡作三標(biāo)記的實(shí)驗(yàn)時(shí)，RRX尤其有用，可以和Cy2(或者FITC)和Cy5一起使用，因?yàn)镽RX的發(fā)射波長(zhǎng)在Cy2和Cy5中間，而且和這兩者覆蓋都很少，氪氬燈激發(fā)光為488nm，598nm和647nm，分別是Cy2(FITC), RRX和Cy5的理想激發(fā)波長(zhǎng)。因?yàn)镕ITC和PE可以被氬燈的488nm波長(zhǎng)激發(fā), 在流式細(xì)胞儀中用FITC作雙標(biāo)，另一種用藻紅蛋白（PE）耦聯(lián)基團(tuán)要比羅丹明好。TRITC為羅丹明的衍生物，呈紫紅色粉末，較穩(wěn)定，最大吸收光波長(zhǎng)為 550nm，最大發(fā)射光波長(zhǎng)為620nm，呈現(xiàn)橙紅色熒光，與FITC的綠色熒光對(duì)比鮮明，可配合用于雙重標(biāo)記或?qū)Ρ热旧?。因TRITC熒光淬滅慢，也可用于單獨(dú)標(biāo)記染色。 菁類染料-Cyanine dyes(Cy2, Cy3, Cy5) Cy2耦聯(lián)基團(tuán)激發(fā)波長(zhǎng)為492nm，發(fā)光波長(zhǎng)為510nm的綠色可見(jiàn)光。Cy2和FITC使用相同的濾波片。由于Cy2比FITC在光下更穩(wěn)定，要避免使用含有磷酸化的苯二胺的封片劑，因?yàn)檫@種抗淬滅劑和Cy2反應(yīng)，在染色片儲(chǔ)存后會(huì)導(dǎo)致熒光微弱和擴(kuò)散。Cy3和Cy5比其他的熒光團(tuán)探針要更亮，更穩(wěn)定，背景更弱。Cy3耦聯(lián)基團(tuán)激發(fā)光的最大波長(zhǎng)為550nm，最強(qiáng)發(fā)射光為570nm。因?yàn)榧ぐl(fā)光和發(fā)射光波長(zhǎng)很接近TRITC, 在熒光顯微鏡中，可使用和TRITC一樣的濾波片。Cy3在氬光燈（514nm或528nm）下可以被激發(fā)出50％的光強(qiáng)，在氦氖燈（543nm）或者汞燈（546nm）下則約75％。Cy3可以和熒光素一起作雙標(biāo)。Cy3還可以和Cy5一起在共聚焦顯微鏡實(shí)驗(yàn)中作多標(biāo)記。Cy5耦聯(lián)基團(tuán)的激發(fā)波長(zhǎng)最大650nm，發(fā)光波長(zhǎng)最大670nm。在氪氬燈（647nm）下它們可被激發(fā)出98％的熒光，在氦氖燈下（633nm）為63％。Cy5可以和很多其他的熒光基團(tuán)一起用在多標(biāo)記的實(shí)驗(yàn)中。由于它的最大發(fā)射波長(zhǎng)在670nm，Cy5很難用裸眼觀察，而且不能用汞燈作理想的激發(fā)。通常觀察Cy5時(shí)采用具有合適激發(fā)光和遠(yuǎn)紅外檢測(cè)器的共聚焦顯微鏡，在水相封片劑中應(yīng)當(dāng)加入抗淬滅劑。使用傳統(tǒng)的表面熒光顯微鏡時(shí)，不推薦使用Cy5。注：由于觀察熒光需要一定波長(zhǎng)的激發(fā)光，必須根據(jù)實(shí)驗(yàn)室已有的儀器可發(fā)光的波段進(jìn)行選擇。另外注意多標(biāo)記中對(duì)探針色彩區(qū)分程度的要求，例如，若丹明紅-X (RRX)和德克薩斯紅(TR)熒光素的區(qū)別就比四甲基若丹明（TRITC）或者Cy3的區(qū)別明顯。如果對(duì)靈敏度有更高的要求，則Cy3和Cy5就比其他的熒光團(tuán)探針要亮。 西美杰代理的全球知名二抗和底物生產(chǎn)廠商LGC·Seracare·KPL提供豐富的熒光標(biāo)記二抗，可檢測(cè)抗人、大鼠、小鼠、豬、驢、綿羊、山羊、小雞、馬、兔、倉(cāng)鼠、狗、牛，以及多種細(xì)菌類等物種；另外，還有IgG、IgA、IgM以及IgG(Fc)、IgG(ab’)2等不同類型抗體。小編下面匯總了部分常用熒光二抗：FITCTRITCCy3Cy5抗人5230-02885230-0288-5230-0370抗小鼠5230-04275230-03365230-03645230-0376抗兔5230-02985230-03325230-03595230-0372抗山羊5230-0294-5230-03585230-0371抗綿羊5230-0324---抗雞5230-0325--5230-0379抗鴨5230-0326---抗狗5230-0314---抗貓5230-0317---鏈霉親和素5270-0028 -5270-0022 -注：表格數(shù)字部分為產(chǎn)品貨號(hào)如對(duì)西美杰代理的LGC·Seracare·KPL產(chǎn)品感興趣歡迎撥打西美杰客服熱線400-050-4006或登錄官方網(wǎng)站www.fushunwax.com.cn了解更多信息。
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Jena Bioscience熒光標(biāo)記試劑盒，科研優(yōu)選
標(biāo)記核苷酸是生命科學(xué)研究的一類關(guān)鍵試劑，是分子生物學(xué)研究中用于檢測(cè)和標(biāo)記特定核酸序列的有效工具，通常通過(guò)酶反應(yīng)將標(biāo)記核苷酸插入到DNA或RNA序列中進(jìn)行檢測(cè)和分析。而熒光基團(tuán)和半抗原是最常用的非放射性DNA/cDNA探針標(biāo)記物。 Nick translation是基因組DNA、質(zhì)粒、BAC克隆等生成標(biāo)記DNA探針（100-500bp）的首選方法。它是基于DNA酶I(introduction of random single-strand breaks (“nicks”)和聚合酶I的協(xié)同反應(yīng)，聚合酶I在“nick”位點(diǎn)結(jié)合標(biāo)記的dUTP，而不是其天然對(duì)應(yīng)物dTTP，從而創(chuàng)造出理想的原位雜交探針。 西美杰代理的Jena Bioscience品牌提供了有豐富的DNA/cDNA標(biāo)記產(chǎn)品，包括熒光標(biāo)記和半抗原標(biāo)記，如下表所示:Fluorescent Nick Translation Labeling Kits 品名 貨號(hào) 規(guī)格 Atto425 NT Labeling Kit PP-305S-425 10 reactions Fluorescein NT Labeling Kit PP-305S-FAMX 10 reactions AF488 NT Labeling Kit PP-305S-AZ488 10 reactions Atto488 NT Labeling Kit PP-305S-488 10 reactions Cy3 NT Labeling Kit PP-305S-CY3 10 reactions Atto550 NT Labeling Kit PP-305S-550 10 reactions AF555 NT Labeling Kit PP-305S-AF555 10 reactions TexasRed NT Labeling Kit PP-305S-TXR 10 reactions AF594 NT Labeling Kit PP-305S-AF594 10 reactions Atto647N NT Labeling Kit PP-305S-647N 10 reactions AF647 NT Labeling Kit PP-305S-AF647 10 reactions Atto680 NT Labeling Kit PP-305S-680 10 reactions Biotin & Digoxigenin Nick Translation Labeling Kits 品名 貨號(hào) 規(guī)格 Biotin16 NT Labeling Kit PP-310S-BIO16 10 reactions Digoxigenin NT Labeling Kit PP-310S-DIGX 10 reactions 北京西美杰科技有限公司為Jena Bioscience中國(guó)代理，為客戶提供完善的技術(shù)支持與售后服務(wù)。歡迎撥打西美杰客服電話400-050-4006或者登陸網(wǎng)站 西美杰代理的Jena Bioscience由德國(guó)馬普所(MPI)的知名分子生物學(xué)家于1998年共同創(chuàng)辦，致力于為全球的科研院所，醫(yī)院，制藥企業(yè)和診斷試劑盒生產(chǎn)企業(yè)提供各類試劑與原料, 供應(yīng)特色標(biāo)記核苷酸/類核苷，標(biāo)記熒光探針、點(diǎn)擊化學(xué)、蛋白結(jié)晶等產(chǎn)品，分別通過(guò)DIN EN ISO 9001，DIN EN ISO 14001，EMAS認(rèn)證，質(zhì)量被80多個(gè)國(guó)家客戶認(rèn)可。 品牌優(yōu)勢(shì)： 以核苷，核苷酸類似物為特色的產(chǎn)品 種類齊全：核苷，核苷酸及類似物，蛋白及蛋白表達(dá)系統(tǒng)，點(diǎn)擊化學(xué)試劑，生物大分子結(jié)構(gòu)研究相關(guān)試劑，分子生物學(xué)和生物化學(xué)相關(guān)試劑 強(qiáng)大的技術(shù)團(tuán)隊(duì)可提供高質(zhì)量定制服務(wù) 產(chǎn)品質(zhì)量有保障，通過(guò)多種認(rèn)證 產(chǎn)品和服務(wù)被80多個(gè)國(guó)家客戶認(rèn)可 主要產(chǎn)品分類： 核苷、核苷酸類似物： 標(biāo)記核苷酸、脫氧/雙脫氧核糖核苷酸、核苷酸類似物 點(diǎn)擊化學(xué)：帶有點(diǎn)擊基團(tuán)的核苷酸、熒光素、生物素、ATP類似物等； 蛋白結(jié)構(gòu)相關(guān)產(chǎn)品：蛋白結(jié)晶條件篩選試劑盒、蛋白結(jié)晶耗材 分子生物學(xué)：不同要求PCR試劑盒及單組分產(chǎn)品，DNA LEEDER，限制性內(nèi)切酶、TAE、TBE 更多>【技術(shù)在線】HCP ELISA方法驗(yàn)證——稀釋線性dilution linearity
稀釋線性（dilution linearity）是驗(yàn)證HCP ELISA方法特異性和準(zhǔn)確性的關(guān)鍵實(shí)驗(yàn)之一，本文詳細(xì)解讀了HCP ELISA方法學(xué)驗(yàn)證中有關(guān)稀釋線性的操作方法與注意事項(xiàng)，歡迎了解。 更多>about us關(guān)于我們
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