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星品推薦 | 人血白蛋白穩(wěn)定劑

血液制品又稱血漿衍生物,英文名稱為Plasma Derivatives,是指從血漿中8%的血漿蛋白中分離提純得到的物質。血漿蛋白由60%的白蛋白、15%的免疫球蛋白、4%的凝血因子和21%的其他蛋白成分組成。從不同的血漿蛋白成分中能夠提取出不同種類的血液制品。 白蛋白作為血漿衍生物中的代表性產品,是維持血漿膠體滲透壓的主要來源,具有調節(jié)血管內外液體平衡以及維持血容量的作用。在臨床上,白蛋白主要用于失血創(chuàng)傷和燒傷等引起的休克、腦水腫,以及肝硬化、腎病引起的水腫或腹水等危重病癥的治療,以及低蛋白血癥患者?;诎椎鞍自谂R床上發(fā)揮的重要作用,中國、歐洲等藥典都對其有詳細描述如下: 藥典 章節(jié) 定義 中國藥典2020版 三部 245頁 本品系由健康人血漿,經低溫乙醇蛋白分離法或經批準的其他分離法分離純化,并經60℃10小時加溫滅活病毒后制成。制品中應加適量的穩(wěn)定劑,按每1g蛋白質加入0.16mmol辛酸鈉或0.08mmol辛酸鈉和0.08mmol乙酰色氨酸鈉。 Ph. Eur. 2020 10th Volume 2, Page 2082 Sterile liquid preparation of a plasma protein fraction containing human albumin. It is obtained from plasma that complies with the monograph Human plasma for fractionation (0853). The preparation may contain excipients such as sodium caprylate (sodium octanoate) or N-acetyl tryptophan or a combination of the two. Ph.USP 2023 (USP46-NF41) Albumin Human Albumin Human is a sterile nonpyrogenic preparation of serum albumin obtained by fractionating merial (source blood, plasma, serum, orlacentas)from healthy human donors, the source materiabeing tested for the absence of hepatitis B surface antigen. lt is a solution containing, in each 100 mL. lt contains no added antimicrobial agent, but maycontain sodium acetyl tryptophanate with or without sodium caprylate as a stabilizing agent. 從各國藥典對成品白蛋白的定義中可以看出,在白蛋白制劑中有兩個非常重要的成分,分別是辛酸鈉和N-乙酰色氨酸。這兩種化學成分在白蛋白制劑中發(fā)揮著無可替代的重要作用,包括: 蛋白穩(wěn)定劑: 防止蛋白質聚集和凝集 抑制微生物生長 提高貯存期的穩(wěn)定性 此外,在其他生物制品生產過程中,辛酸鈉和N-乙酰色氨酸的應用也十分廣泛。例如,在菌種特殊選育過程中,辛酸鈉可被用作培養(yǎng)基中的添加劑,以改善菌種的生長和目標蛋白的表達特性;有機化學基礎研究中,辛酸鈉可以用作一種添加劑或催化劑。在生物醫(yī)學研究中,N-乙酰-DL-色氨酸被廣泛用于構建蛋白質微泡,在造影成像、靶向藥物遞送、基因治療等方面發(fā)揮重要作用,尤其在跨越血腦屏障遞送藥物方面具有潛力。在實驗室研究中,N-乙酰-DL-色氨酸可用于識別細菌菌株的診斷工具。為了滿足白蛋白成品對高品質原料的需求,AppliChem將辛酸鈉和N-乙酰色氨酸全面升級為低內毒素原料級別,符合多國藥典。產品詳情如下表。 貨號 品名 規(guī)格 CAS 636454 Sodium Caprylate (USP-NF, BP, Ph. Eur., ChP) low endotoxin, IPEC grade 辛酸鈉 10kg/25kg 1984-06-1 637763 N-Acetyl-DL-Tryptophan (Ph. Eur, BP) low endotoxin, pharma grade N-乙酰-DL-色氨酸 5kg/25kg 87-32-1 產品特點: 符合Ph. Eur、USP、BP、ChP多國藥典· 高純度,低內毒素,低金屬雜質殘留· 符合ICH Q3D標準,對24種金屬離子殘留進行檢測 截至目前,AppliChem的辛酸鈉和N-乙酰色氨酸已在國際上數(shù)個白蛋白和其他生物制藥相關項目中被廣泛使用。 除了辛酸鈉和N-乙酰色氨酸, Applichem還提供其他與血漿衍生物相關的產品,詳情如下。如有興趣,請聯(lián)系AppliChem的中國總代理西美杰獲取更多信息。。 貨號 品名 規(guī)格 CAS號 63B764 6-Aminohexanoic Acid (Ph. Eur., BP, USP) IPEC grade 6-氨基己酸 5 kg 60-32-2 631632 Sodium Acetate 3-hydrate (Ph. Eur, BP, USP) IPEC grade三水合醋酸鈉 5 kg/25 kg 6131-90-4 西美杰是PanReac AppliChem中國總代理,為用戶提供完善的技術支持與售后服務。如對產品感興趣歡迎撥打西美杰客服熱線400-050-4006或登錄網站www.fushunwax.com.cn了解更多信息。 更多>

新年又添喜訊!Pfanstiehl 注射級L-組氨酸 (H-116) CDE登記號已激活轉A!

“ 熱烈祝賀Pfanstiehl品牌注射級組氨酸H-116 CDE注冊登記號F20200000338已激活!”Pfanstiehl新年喜訊頻傳,繼注射級精氨酸才激活之際,注射級組氨酸H-116 CDE登記號F20200000338在千呼萬喚中也終于激活轉A了。Pfanstiehl品牌注射級組氨酸H-116,于2020年推出之際,便秉承一貫高品質理念,具有超高純度,超低內毒素,超低金屬殘留的特點,單獨檢測29種金屬離子,符合多國藥典規(guī)定(USP, EP, JPE, ChP),可用于生物治療性藥物和疫苗的生產。Pfanstiehl 注射級組氨酸將于2025年3月再一次全面提升質量指標,進一步縮窄29種金屬離子的質控指標,低至ppb水平;并根據(jù)FDA和EMA關于亞硝酸鹽的指南,新增10種亞硝酸鹽的質控;并加入DNA,RNA,DNA酶,RNA酶和脂肪酶,磷酸酶,蛋白酶等各種酶類的控制,進一步降低可能由組氨酸引入的對蛋白穩(wěn)定性和對其他輔料如吐溫降解的負面影響。產品信息: · 產品名稱: L-Histidine, High Purity, Low Endotoxin, Low Metals, USP, EP, BP, JP, ChP (H-116)· 中文名稱:L-組氨酸· 分子式:C6H9N3O2· 分子量:155.15g / mol· CAS號:71-00-1· 產品貨號:H-116產品特點:· 超高純度,超低內毒素,超低微生物含量,超低金屬雜質殘留· 質量指標新增DNA,RNA,DNA酶,RNA酶,脂肪酶和亞硝酸鹽檢測· 符合多國藥典:USP, EP, BP,JPE,ChP· 符合ICH Q3D標準· 符合GMP標準產品應用:· 緩沖液如果您對Pfanstiehl的注射級L-組氨酸H-116 感興趣,可聯(lián)系Pfanstiehl中國區(qū)代理北京西美杰科技有限公司獲得詳細的產品概況說明文件如下。也歡迎聯(lián)系獲取測試樣品。Pfanstiehl Inc.產品系列如下,歡迎聯(lián)系北京西美杰科技有限公司獲取100g裝免費樣品。 北京西美杰科技有限公司為Pfanstiehl中國代理,為客戶提供完善的技術支持與售后服務。歡迎撥打西美杰客服電話400-050-4006或者登陸網站www.fushunwax.com.cn了解更多信息。 更多>

Cygnus HCPs親和純化抗體申購指南

Cygnus HCPs親和純化抗體申購指南為了更好地滿足抗體覆蓋率驗證的多樣化需求,Cygnus公司限量提供與HCPs ELISA試劑盒匹配的HCPs親和純化抗體,包括生物素標記親和純化抗體、HRP標記親和純化抗體等多種類型,抗體查詢請點擊這里。 所有用戶在申購HCPs親和純化抗體前,必須按照實際應用需求填寫《Cygnus HCPs親和純化抗體申購表》,通過Cygnus審核后方可獲取報價并購買。具體申購流程如下: 掃碼下方二維碼,即刻填寫《Cygnus HCPs親和純化抗體申購表》注意事項:報價號只能使用一次,下單后失效,再次購買抗體需要重新填寫申購表獲取報價,請準確填寫表中要求的所有信息。如果您有任何疑問,歡迎聯(lián)系Cygnus中國區(qū)總代理北京西美杰科技有限公司。希望以上信息能幫助您順利購買到Cygnus Technologies親和純化抗體產品。Cygnus Technologies專注為生物技術和生物制藥行業(yè)提供產品和分析方法超過25年,旨在加速研發(fā)階段和提高產品質量。Cygnus開發(fā)和生產的生物工藝殘留試劑盒,用于檢測超過50種不同表達系統(tǒng)的特異性雜質。Cygnus作為專注于生物技術應用免疫檢測的高靈敏度分析技術的專家,其產品和服務已經被全球超過95%以上生物制藥公司使用,并獲得FDA、NMPA、EMA等監(jiān)管機構的廣泛認可。 北京西美杰科技有限公司作為Cygnus在中國總代理,與國內眾多知名藥企,CRO/CMO企業(yè)建立了長久穩(wěn)定的合作關系。多年來西美杰的產品及服務幫助許多企業(yè)加速R&D階段,提高藥物質量、純度和安全,加速優(yōu)化研發(fā)工藝,減少產品上市時間,降低QC成本。如您對上述產品感興趣,歡迎致電西美杰客服熱線400-050-4006或者登陸網站www.fushunwax.com.cn了解更多信息。 更多>

喜大普奔!Pfanstiehl 注射級L-精氨酸 (A-170) CDE登記號已激活!

“ 熱烈祝賀Pfanstiehl品牌注射級精氨酸A-170 CDE注冊登記號F20190000412已激活!”Pfanstiehl新年喜訊頻傳,注射級精氨酸A-170 CDE登記號F20190000412激活了。Pfanstiehl品牌注射級精氨酸A-170,秉承一貫高品質理念,具有超高純度,超低內毒素,超低金屬殘留的特點,單獨檢測29種金屬離子,并且新增DNA,RNA,DNA酶,RNA酶和脂肪酶,亞硝酸鹽等多項質量指標的檢測,符合多國藥典規(guī)定(USP, EP, JPE, ChP),可用于生物治療性藥物和疫苗的生產。產品信息: · 產品名稱: L-Arginine, High Purity, Low Endotoxin, Low Metals, USP,EP, JP, ChP (A-170)· 中文名稱:L-精氨酸· 分子式:C6H14N4O2· 分子量:174.20 g / mo· CAS號:74-79-3· 產品貨號:A-170產品特點:· 超高純度,超低內毒素,超低微生物含量,超低金屬雜質殘留· 質量指標新增DNA,RNA,DNA酶,RNA酶,脂肪酶和亞硝酸鹽檢測· 符合多國藥典:USP, EP, JPE, ChP· 符合ICH Q3D標準· 符合GMP標準產品應用:· 緩沖液· 降粘 如果您對Pfanstiehl的注射級L-精氨酸A-170 感興趣,可聯(lián)系Pfanstiehl中國區(qū)代理北京西美杰科技有限公司獲得詳細的產品概況說明文件如下。也歡迎聯(lián)系獲取測試樣品。Pfanstiehl Inc.產品系列如下,歡迎聯(lián)系北京西美杰科技有限公司 獲取100g裝免費樣品。 北京西美杰科技有限公司為Pfanstiehl中國代理,為客戶提供完善的技術支持與售后服務。歡迎撥打西美杰客服電話400-050-4006或者登陸網站www.fushunwax.com.cn了解更多信息。 更多>

抗體片段捕獲的利器---Fabsorbent? F1P HF親和層析填料

近年來,抗體和抗體片段在生物大分子治療和診斷領域備受關注,很多抗體類藥物已經步入商業(yè)化生產階段。相較于完整的抗體,抗體片段分子量低,組織滲透性好,少有復雜的糖基化結構,可以使用多種原核或真核細胞培養(yǎng)平臺進行表達,已成為很多生物技術公司的研究熱點。與完整的抗體不同,很多抗體片段分子結構中沒有Fc端,無法用傳統(tǒng)的Protein A親和層析填料進行捕獲,而Protein L親和層析填料,由于可以結合抗體輕鏈的可變區(qū)域,為抗體片段的捕獲提供了可靠的技術手段。但市面上常見的Protein L親和層析填料穩(wěn)定性普遍較低,填料無法耐受高濃度堿液的清潔,配基脫落嚴重,且價格昂貴,給純化工藝帶來了極大的挑戰(zhàn)。 FabsorbentTM F1P HF是Astrea Bioseparations公司近年來推出的親和層析填料,填料基架是粒徑均一的高交聯(lián)瓊脂糖,基架上修飾有化學合成的小分子配基,可以高效捕獲各種抗體片段分子。相較于Protein L親和層析填料,F(xiàn)absorbentTM F1P HF的結合范圍更廣泛,填料可以耐受高達1M NaOH的清潔,其主要優(yōu)勢特點歸納如下: 結合范圍廣,既可以結合kappa型輕鏈,也可以結合lambda型輕鏈,對一些非人源性的抗體(如鼠源性、牛源性、羊源性等)也有一定的結合能力,可廣泛地用于F(ab’)2, Fab, scFv, VL, IgG的捕獲。 小分子化學合成配基,無動物源性,穩(wěn)定性好,安全性高。 填料可以耐受0.5-1M NaOH的清潔和消毒,清潔效果好,壽命長。 應用案例1:FabsorbentTM F1P HF捕獲F(ab’)2抗體片段 在該測試案例中,研究人員使用胃蛋白酶將完整的IgG水解為Fc和F(ab’)2片段,并上樣到FabsorbentTM F1P HF層析柱中,工藝參數(shù)如下表所示: 層析柱: CV=10mL 層析填料: FabsorbentTM F1P HF 流速: 250cm/h 平衡液: 25mM Tris-HCl, pH 8.0 洗脫液: 50mM sodium citrate, pH 3.0 清潔: 0.5M NaOH 由圖1的層析圖譜和圖2的SDS-PAGE電泳圖譜可以看出,F(xiàn)absorbentTM F1P HF可以高效捕獲料液中的F(ab’)2片段,經洗脫后,得到高純度的F(ab’)2分子,層析前添加的胃蛋白酶可被有效去除。 圖1:FabsorbentTM F1P HF捕獲F(ab’)2的層析圖譜 圖2:SDS-PAGE電泳圖譜(Lane 1是molecular weight marker;Lane 2是IgG標準品;Lane 3是胃蛋白酶水解后料液;Lane 4是流穿和淋洗液;Lane 5是洗脫液。) 應用案例2:FabsorbentTM F1P HF捕獲CHO表達的Fab抗體片段 在該應用案例中,研究人員使用CHO細胞表達Fab抗體片段,細胞收獲液經澄清后,上樣到FabsorbentTM F1P HF層析柱中,工藝參數(shù)如下表所示: 層析柱: 10mm×5cm,CV=4mL 層析填料: FabsorbentTM F1P HF 流速: 300cm/h,上樣流速50cm/h 平衡液: 50mM sodium phosphate, pH 8.0 上樣: 澄清后的CHO細胞收獲液(含F(xiàn)ab),pH 8.0 洗脫液(測試1): 50mM sodium citrate, pH 3.0 洗脫液(測試2): 50mM sodium acetate, pH 4.0 淋洗液(測試3): 50mM glycine-NaOH, pH 9.0 洗脫液(測試3): 50mM sodium acetate, pH 4.0 清潔: 0.5M NaOH 測試還研究了不同的洗脫工藝條件,測試1采用了pH 3.0的等度洗脫方式,測試2采用了pH 4.0的等度洗脫方式,測試3先采用pH 9.0的甘氨酸緩沖液進行上樣后的淋洗,隨后用pH 4.0的醋酸鹽緩沖液進行等度洗脫。 由圖4的SDS-PAGE電泳圖譜可以看出,F(xiàn)absorbentTM F1P HF可以有效捕獲細胞收獲液中的Fab抗體片段。三種洗脫方式均可以確保大于90%的目標Fab純度,且回收率極高。其中,在測試2的洗脫條件下,F(xiàn)ab純度和回收率最高。在測試3的條件下,洗脫前使用pH 9.0的甘氨酸緩沖液淋洗能去除少量非特異性結合的雜質蛋白。 圖3:FabsorbentTM F1P HF捕獲Fab的層析圖譜(測試2) 圖4:SDS-PAGE電泳圖譜(Lane 1是molecular weight marker;Lane 2是純化后的Fab對照品;Lane 3澄清后的CHO細胞收獲液;Lane 4是測試1的流穿液;Lane 5是測試1 的洗脫液;Lane 6是測試2的流穿液;Lane 7是測試2的洗脫液;Lane 8是測試2的再生液(citrate, pH 3.0);Lane 9是測試3的流穿液;Lane 10是測試3的淋洗液;Lane 11是測試3的洗脫液。) 應用案例3: FabsorbentTM F1P HF捕獲E.coli表達的VL抗體片段 在該應用案例中,研究人員使用E.coli表達VL抗體片段,經細胞裂解和澄清后,直接上樣到FabsorbentTM F1P HF層析柱中,工藝參數(shù)如下表所示: 層析柱: CV=1mL 層析填料: FabsorbentTM F1P HF 流速: 保留時間=3min 平衡液: 25mM Tris-HCl, pH 9.0 洗脫液: 50mM sodium citrate, pH 3.0 清潔: 0.5M NaOH 由圖5的層析圖譜和圖6的SDS-PAGE電泳圖譜可以看出,F(xiàn)absorbentTM F1P HF可以有效捕獲復雜料液中的VL抗體片段,大量雜質蛋白在上樣和淋洗過程中被去除,經洗脫后,可以得到純度極高的目標分子VL。 圖5:FabsorbentTM F1P HF捕獲VL的層析圖譜 圖6:SDS-PAGE電泳圖譜(Lane 1是molecular weight marker;Lane 2是澄清后的E.coli裂解液;Lane 3是流穿液;Lane 4是淋洗液;Lane 5是洗脫液;Lane 6是清潔液。) FabsorbentTM F1P HF親和層析填料的技術參數(shù) 配基: 化學合成的三嗪類配基 基架: 粒徑均一的高交聯(lián)瓊脂糖(PuraBead® 6HF) 平均粒徑: 90±10µm 結合載量: Human Fab: 20mg/ml adsorbent Human IgG: ≥40mg/ml adsorbent 操作流速: up to 500cm/h pH穩(wěn)定性: 3-13(三個月以上的長期測試數(shù)據(jù)) 清潔/消毒: 0.5-1M NaOH, 25℃ 保存: 20%乙醇,2-30℃ FabsorbentTM F1P HF親和層析填料產品信息 散裝填料 貨號 產品名稱 規(guī)格 3904-00025 FabsorbentTM F1P HF 25 mL 3904-00100 FabsorbentTM F1P HF 100 mL 3904-00500 FabsorbentTM F1P HF 500 mL 3904-01000 FabsorbentTM F1P HF 1 L 預裝柱 貨號 產品名稱 規(guī)格 6632 FabsorbentTM F1P HF Column Kit, 4 x 1 ml 4 x 1 ml預裝柱 6633 FabsorbentTM F1P HF Column Kit, 4 x 5 ml 4 x 5 ml預裝柱 2233 FabsorbentTM F1P HF PuraPlate 96孔板 參考資料: S. Kittler et al., Protein L-more than just an affinity ligand, 2021 Brochure: Purify and capture of antibody fragments with a new synthetic ligand affinity adsorbent FabsorbentTM F1P HF, Astrea Bioseparations Technical Note: Fab and F(ab’)2 fragment purification from CHO cell culture supernatant using Fabsorbent? F1P HF, Astrea Bioseparations Technical User Guide: FabsorbentTM F1P HF, Astrea Bioseparations Astrea Bioseparations于1987年孵化自劍橋大學,擁有超過30年層析介質研發(fā)和生產經驗,是世界級層析介質產品與服務供應商。目前使用Astrea的產品已有超過21個生產工藝通過了FDA和EMA的批準。Astrea Bioseparations在全球擁有3個研發(fā)和生產基地,專注為生物大分子和CGT領域提供行業(yè)領先的層析介質和技術服務。Astrea Bioseparations推出的基于納米纖維的新型層析技術,解決了傳統(tǒng)生物分離工具載量低和工藝耗時問題,實現(xiàn)更快、更環(huán)保、更具成本效益的純化過程,完全符合當今生物治療創(chuàng)新的需求。 西美杰是Astrea Bioseparations中國區(qū)代理,為用戶提供完善的技術支持與售后服務。歡迎隨時撥打西美杰客服熱線400-050-4006或登錄網站www.fushunwax.com.cn了解更多信息。 更多>

新年首發(fā) I Pfanstiehl 重磅推出注射級甘氨酸Glycine (G-140)

甘氨酸是結構最簡單的氨基酸,學名氨基乙酸,分子式為C2H5NO2。常溫下是白色結晶或結晶性粉末,味甜。它極易溶于水,在乙醇、丙酮這些有機溶劑里也能溶解,展現(xiàn)出較好的親水性。甘氨酸分子內既有酸性羧基(-COOH),又有堿性氨基(-NH2),這使其既能和酸反應,也能與堿反應,在不同的pH環(huán)境呈現(xiàn)出多樣的離子化狀態(tài),緩沖能力出色。因其特點,甘氨酸在醫(yī)藥輔料制劑中應用廣泛,并具有諸多優(yōu)勢,如以下應用:緩沖劑: 甘氨酸分子的兩性離子特點,使其在不同的pH環(huán)境能穩(wěn)定溶液酸堿度,讓制劑環(huán)境維持穩(wěn)定,保障藥物活性成分不受酸堿性變動影響,這對生物制品、酶類藥物等對pH敏感的藥物制劑極為關鍵。增溶劑:甘氨酸親水性良好,能夠和難溶性藥物分子相互作用,降低藥物分子之間的聚集,讓藥物以分子或離子態(tài)分散,增加其在溶劑里的溶解度,有助于難溶藥物制成溶液劑。 穩(wěn)定劑:在蛋白類、多肽類藥物制劑里,甘氨酸能夠優(yōu)先與周圍水分子結合,減少藥物分子的水化層干擾,防止藥物因聚集、變性而失活,能很好的維持這類生物大分子藥物的穩(wěn)定性。但甘氨酸在應用于醫(yī)藥輔料時也有其局限性,如在應用于凍干制劑時,容易發(fā)生結晶形態(tài)異常,在與其他輔料一同使用時,會改變整個凍干體系的塌陷溫度;在被用于調節(jié)注射劑滲透壓時,使用不當會容易導致滲透壓過高等。尤其是,甘氨酸作為藥用輔料對純度要求極高,甘氨酸原料中的雜質,哪怕是微量存在,進入人體后也能引發(fā)免疫反應或毒副作用。提純甘氨酸達到注射級標準,技術難度大且成本高,所以一定程度限制了它在藥用制劑中的大規(guī)模應用。Pfanstiehl秉承一貫高品質理念,為滿足全球生物制藥行業(yè)對于高品質甘氨酸的需求,隆重推出注射級甘氨酸Glycine (G-140), 具有超高純度,超低內毒素,超低金屬殘留的特點,單獨檢測29種金屬離子,并且新增DNA,RNA,DNA酶,RNA酶和脂肪酶,亞硝酸鹽等多項質量指標的檢測,符合多國藥典規(guī)定(USP, EP, BP, JPE, ChP),可用于生物治療性藥物和疫苗的生產。 產品信息: · 產品名稱:Glycine, High Purity, Low Endotoxin, Low Metals, USP, EP, BP, JPE, ChP (G-140)· 中文名稱:甘氨酸· 分子式:C2H5NO2· 分子量:75.07 g / mol· CAS號:56-40-6· 產品貨號:G-140產品特點:· 超高純度,超低內毒素,超低微生物含量,超低金屬雜質殘留· 質量指標新增DNA,RNA,DNA酶,RNA酶,脂肪酶和亞硝酸鹽檢測· 符合多國藥典:USP, EP, BP, JPE, ChP· 符合ICH Q3D標準· 符合GMP標準· 美國DMF和中國CDE藥用輔料登記工作進行中產品應用:· 緩沖劑· 穩(wěn)定劑· 增溶劑如果您對Pfanstiehl注射級別Glycine G-140感興趣,歡迎聯(lián)系Pfanstiehl 中國區(qū)代理北京西美杰科技有限公司獲得如下詳細的產品概況說明文件和測試樣品。 Pfanstiehl Inc.其他產品系列如下,歡迎聯(lián)系北京西美杰獲取100g裝免費樣品。北京西美杰科技有限公司為Pfanstiehl中國代理,為客戶提供完善的技術支持與售后服務。歡迎撥打西美杰客服電話400-050-4006或者登陸網站www.fushunwax.com.cn了解更多信息。 更多>

【技術在線】HCP ELISA方法驗證——加標回收(Spike & Recovery)

前言 在ELISA試劑盒的使用過程中,確保結果的準確性至關重要。為了有效識別樣品配方與試劑盒組分之間的兼容性,加標回收這一關鍵驗證試驗顯得尤為重要。它不僅是評估ELISA試劑盒準確性的重要工具,也是滿足法規(guī)和藥典(如ICH或FDA指南等)對商品化ELISA試劑盒方法學驗證要求的可靠方式。 什么是加標回收? 加標回收就是將已知量的標準品添加到樣品中(“加標”,spiking),通過對比加入前后的檢測結果,評估“回收”(recovery)測量值的準確性。這一過程可以揭示樣品及其緩沖液中某些成分是否會干擾檢測結果。目前,影響ELISA試劑盒定量結果的常見因素包括極端pH、去污劑、有機溶劑、高蛋白質濃度以及高鹽濃度等。因此,在進行加標回收實驗之前,確保排除這些干擾因素是至關重要的。 如何判定干擾因素? 樣品或緩沖液中的某些成分可能會影響HCP或其他雜質的檢測與定量,導致回收結果的高估或低估,由此說明樣品中存在干擾因素。同樣,上游收獲物和過程樣品的基質中也可能存在疑似干擾 ELISA 檢測的成分。 在有干擾的情況下,實驗結果通常表現(xiàn)為回收率偏低。但是,如果藥物本身或其他基質組分與捕獲或檢測抗體有相互作用,則可能表現(xiàn)為回收率偏高。 此外,非特異性干擾,如試劑與孔板的結合,也會導致OD值偏高。通過合理控制實驗流程,可以找出具體的干擾因素。 何時進行加標回收實驗? 在進行加標回收實驗前,需要先完成樣品的稀釋線性分析,只有明確了最低需求稀釋倍數(shù)(MRD),加標回收分析才有意義。(稀釋線性分析的詳細內容請參考《HCP ELISA方法驗證——稀釋線性dilution linearity》) (Tips:每種類型的樣品基質都需要進行加標回收分析。同時如果實驗步驟進行了優(yōu)化,則需要重復此實驗以確保檢測的有效性。) 如何執(zhí)行加標回收分析? 樣品制備: 加標樣品:可以設定3-4個不同濃度的標準品加入到不同類型待檢樣品中,制備成加標樣品,需要注意的是加標樣品的濃度需在滿足MRD的條件下進行分析,也就是最低加標濃度不能低于LOQ的兩倍。 對照樣品:按相同體積比在每種待檢樣品中加入樣品稀釋液,制備成對照樣品,用于測定樣品本底的HCP濃度。 實驗過程: 使用ELISA試劑盒同時檢測加標樣品和對照樣品,每個樣品最好做3個重復孔,以計算均值。 結果分析: 回收率計算公式: 如下表案例所示,我們使用大腸桿菌HCP ELISA試劑盒(F410)分別檢測加標樣品(100 ng/mL標準品與樣品按1:4體積比混合,加標濃度為20 ng/mL)和對照樣品(樣品稀釋液與樣品按1:4體積比混合),通過測得的HCP濃度計算出回收率為95%。依據(jù)ICH、FDA及EMA等分析方法驗證指南要求,HCP加標回收率的可接受范圍應在75%~125%。 為了方便您快速了解如何用4倍稀釋法制備加標樣品和ELISA布板的詳細步驟,請觀看以下操作視頻。加標回收問題排查 如果加標回收數(shù)據(jù)顯示出明顯的產物或基質干擾,您可能需要通過進一步稀釋樣品或置換緩沖液等方式來獲取準確的檢測結果。理想情況下,請選擇與標準品相同的稀釋液進行樣品稀釋,這樣可以最大限度地減少偏差。在某些情況下,調整檢測方法也許能提高特定樣品類型的準確性,但請務必謹慎操作,以免影響結果的可靠性。 為了全力支持客戶進行加標回收驗證及方法學開發(fā),Cygnus為每款ELISA試劑盒都配備了相應的標準品,詳情請查閱下表。貨號品名規(guī)格適用的試劑盒貨號F553H-1CHOHCP Antigen Concentrate, 3G400 µlF550-1F1048XCHO Lysate HCP AntigenConcentrate200 uLF1045F1023XE.coli HCP 2G Antigen Concentrate200 uLF1020F1063XBL21(DE3) HCP AntigenConcentrate200 µlF1060F653SXHEK293 Antigen Concentrate250 µlF650SF1043XSf9 HCP 3G AntigenConcentrate200 µlF1040F1018XP.pastoris HCP Antigen Concentrate200 µlF1015F143UP. pastoris AntigenConcentrate200 µlF140/F640F978XVeroCell 2G HCP Antigen Concentrate400 µlF975F1058XPER.C6 HCP 2G AntigenConcentrate200 µlF1055F1033XSP2/0HCP 2G Antigen Concentrate200 uLF1030F998XPG13 HCP AntigenConcentrate200 uLF995F493GL.lactis HCP Antigen Concentrate 200 µlF490F233GA549 Antigen Concentrate200 µlF230F813XHeLaAntigen Concentrate1 mlF810F803XMDCK Antigen Concentrate1 mlF800F513GBHKHCP Antigen Concentrate1 mlF510F227CNS/0 Antigen Concentrate1 mlF220F453XP.fluorescens Antigen Concentrate1 mlF450F823XCAP® Antigen Concentrate400 µlF820F1028XC1HCP Antigen Concentrate200 uLF1025F603XProtein A AntigenConcentrate250 µlF600F613XProteinA Antigen Concentrate250 µlF610F403HProtein A AntigenConcentrate200 µlF400F044ProteinA Concentrate200 µlF050/F050HF740-CAmsphere? A3 Ligand Protein A Control250 µlF740F968XAvantorJ.T.Baker® BAKERBOND® PROchievA? Protein A Antigen Concentrate250 µlF965F743XAmsphere? A3 Ligand Protein A Antigen Concentrate300 µlF740F1068XProteinL Antigen Concentrate200 µlF1065F963XEndonucleaseGTP® AntigenConcentrate500 µlF960F031GBSAAntigen Concentrate1 mlF030雖然加標回收可以驗證HCP ELISA的準確性,但這只是整體方法學驗證的一部分。完整的驗證過程仍需包括精密度、LOD、LLOQ、ULOQ和HCP抗體覆蓋率等分析。Cygnus針對每一種檢測試劑盒均提供相應的QS(Qualification Summary)文件,如有需求歡迎點擊這里填寫信息索取,或直接聯(lián)系Cygnus中國總代理西美杰。如您在使用Cygnus HCP ELISA試劑盒的過程中遇到任何問題,我們的技術支持團隊將竭誠為您提供解決方案和建議。Cygnus Technologies專注為生物技術和生物制藥行業(yè)提供產品和分析方法超過25年,旨在加速研發(fā)階段和提高產品質量。Cygnus開發(fā)和生產的生物工藝殘留試劑盒,用于檢測超過50種不同表達系統(tǒng)的特異性雜質。Cygnus作為專注于生物技術應用免疫檢測的高靈敏度分析技術的專家,其產品和服務已經被全球超過95%以上生物制藥公司使用,并獲得FDA、NMPA、EMA等監(jiān)管機構的廣泛認可。北京西美杰科技有限公司作為Cygnus在中國總代理,與國內眾多知名藥企,CRO/CMO企業(yè)建立了長久穩(wěn)定的合作關系。多年來西美杰的產品及服務幫助許多企業(yè)加速R&D階段,提高藥物質量、純度和安全,加速優(yōu)化研發(fā)工藝,減少產品上市時間,降低QC成本。如您對上述產品感興趣,歡迎致電西美杰客服熱線400-050-4006或者登陸網站www.fushunwax.com.cn了解更多信息。 更多>

新品上市 | 舟帆生物IEC-HPLC通用流動相

前言 離子交換色譜法是一種重要的生物化學分離技術,它基于帶電分子與固定相之間的相互作用,廣泛應用于蛋白質分析,使得通過酸堿變體推導蛋白相關降解途徑成為可能,并為相關的質量控制和分子優(yōu)化提供指導數(shù)據(jù)。而在蛋白質分析過程中,離子交換色譜法方法開發(fā)是非常困難的,這受困于每個蛋白的空間結構和氨基酸排列截然不同,這種跳躍式的變化使得每種蛋白擁有不同的等電點與唾液酸或糖基化程度,這大大增加相關方法開發(fā)的困難程度,此開發(fā)的關鍵步驟包括多步:選擇合適的離子交換介質、優(yōu)化緩沖體系、確定洗脫條件、調整流速和柱溫等。這些步驟確保了離子交換色譜法在蛋白質分析中的有效性和可靠性,但繁瑣的方法開發(fā)步驟也為試驗帶來極大的時間成本,間接的增加投入成本,且伴隨著方法開發(fā)失敗的風險,這成為蛋白藥物分析領域迫在眉睫的問題。舟帆生物已經開發(fā)出關于離子交換色譜法的通用流動相,并取得了令人鼓舞的進展。由于樣品中各組分的電荷性質、大小、形狀和疏水性等都會影響離子交換色譜的過程和結果,選擇合適的離子交換介質和緩沖體系尤為重要。離子強度、pH值、溫度和流速等色譜條件的優(yōu)化需要通過實驗來確定,并且離子交換色譜法中離子強度和pH值的微小變化都可能導致分離效果的顯著差異。在日常配制關于離子交換色譜法流動相時精確控制這些參數(shù)是實現(xiàn)穩(wěn)定和重復性分離的關鍵。然而,在實際操作中,由于緩沖液的制備和使用過程可能會引入誤差,通常導致色譜峰保留時間的遷移等問題。為了解決上述問題,舟帆生物自主開發(fā)并優(yōu)化出了一款用于離子交換色譜法的通用流動相,該產品綜合考慮了分析成本和時間效率,在離子色譜方法開發(fā)過程中兼具了分離效率、分析時間和成本,提供了一種高效、經濟且通用的離子交換色譜流動相的選擇。 材料與方法 儀器、色譜柱 安捷倫1260 高效液相色譜系統(tǒng)ThermoProPac? WCX-10 HPLC 10μm 4×250mm色譜柱樣品 實驗中用到的樣品包括8個蛋白藥物樣品均來自合作方浙江大學藥學院生物藥制劑與分析團隊。IEC-HPLC參數(shù) 下表列出了使用ZF-LC-0002流動相A&B(10×)進行IEC-HPLC液相分析的色譜參數(shù):實驗參數(shù) 將8種蛋白稀釋到1mg/mL,并使用CpB酶酶切,酶切后的樣品10000 rmp/min離心十分鐘取上清液進樣檢測。結果 見圖1。圖1. 8 種蛋白藥物的IEC-HPLC 色譜圖 結論 開發(fā)出一種離子交換色譜法通用的流動相,在8種蛋白藥物樣品的分析中使用簡單的洗脫條件即可對蛋白分子的酸性變體和堿性變體達到較好的分離,為離子交換色譜法相關的方法開發(fā)提供了一項優(yōu)異選項,可以為企業(yè)和相關研究單位大大縮短方法開發(fā)時間和投入。產品訂購信息 貨號 品名 規(guī)格 ZF-LC-0002IEC-HPLC通用流動相(10×)盒(含A液、B液各1000mL) 試用申請 IEC-HPLC通用流動相試用裝火熱申請中,如您對上述產品感興趣,請關注“西美杰微信公眾號”,發(fā)送關鍵詞“IEC”,填寫問卷即可獲得免費試用機會,數(shù)量有限,先到先得!品牌介紹 杭州舟帆生物科技有限公司成立于2018年,擁有一支高效的研發(fā)團隊,是一家專注于生物科技領域的公司。公司在蛋白質藥品工藝開發(fā)和優(yōu)化、分子診斷等領域擁有豐富的經驗和技術優(yōu)勢。我們的產品包括商業(yè)化毛細管凝膠電泳檢測試劑盒、高效液相色譜離子交換檢測試劑盒、細胞培養(yǎng)試劑、分子診斷試劑等。這些產品廣泛應用于生命科學研究、藥物開發(fā)等領域,與眾多知名研究機構和企業(yè)建立了緊密的合作關系,共同推動生物科技的發(fā)展和應用。北京西美杰科技有限公司是舟帆生物總代理,始終秉承著專業(yè)、嚴謹?shù)膽B(tài)度為客戶提供優(yōu)質的產品與服務。如果您對上述產品感興趣,歡迎致電北京西美杰客服熱線400-050-4006或登錄網站www.fushunwax.com.cn了解更多產品信息。 更多>

抗體親和提取(AAE?):革新宿主細胞蛋白(HCPs)分析的新篇章

在生物制藥領域,對宿主細胞蛋白(HCPs)的精準分析與控制是確保藥物安全與有效性的關鍵環(huán)節(jié)。各國法規(guī)都有關于HCPs的論述,要求必須對生物藥品進行分析和純化,以將宿主細胞蛋白HCPs降低到可接受的水平。 不同監(jiān)管機構宿主細胞蛋白(HCPs)法規(guī)要求: 《中國藥典》(2020版)三部規(guī)定:針對CHO細胞,HCPs殘留需要<0.05%(相當于小于500ppm);針對E.coli,HCP殘留需要<0.01%。 美國藥典USP<1132>章節(jié)規(guī)定:用一種靈敏度較高的方法檢測藥品中的HCPs,其含量應該低于檢測限(通常小于100ppm,即1mg總蛋白中HCPs含量應小于100ng,也即<0.01%)。 歐洲藥典EP 2.6.34中規(guī)定:在生物制品中,HCP的含量應當小于0.1%。 國際人用藥品注冊技術協(xié)調會(ICH)指南:ICH Q6B指出,需要根據(jù)ICH準則采用敏感且經過驗證的有效方法來監(jiān)控殘留的HCPs,其殘留量通常要求小于100ppm。ELISA是各國藥典推薦的在生物制品中檢測殘留HCPs的方法,可以測定HCPs的總量。并且ELISA的操作簡便,是經典的免疫學檢測方法。但ELISA檢測HCPs也有方法的局限性,比如不能從ELISA的結果中知道樣品中有哪些HCPs,或者用于檢測的抗體與哪些HCPs發(fā)生了免疫反應。因此,監(jiān)管部門要求在使用ELISA檢測過程中HCPs殘留含量時,不僅要通過方法學驗證證明試劑盒的準確度,精密度,靈敏度等,而且還需要證明使用的HCPs抗體有廣泛的反應性,即HCPs抗體覆蓋率。圖 1 HCP ELISA試劑盒檢測流程 什么時候做HCPs抗體覆蓋率驗證? 美國藥典USP<1132>和歐洲藥典EP2.6.34. HOST-CELL PROTEIN ASSAYS將HCPs檢測方法分為:商業(yè)化試劑盒、產品/工藝專屬性方法和平臺化方法。并指出在產品開發(fā)的不同階段,推薦采用不同的ELISA試劑盒用于HCPs的檢測。 USP<1132>提到在沒有平臺化方法的情況下可以在臨床前、臨床I期、II期使用商品化試劑盒;在臨床III期/工藝驗證及產品上市后,由于商業(yè)化的通用HCP檢測試劑盒抗體的覆蓋率往往不足等局限性,需要考慮結合細胞類型及工藝特異性等因素,使用平臺化方法或針對上游工藝開發(fā)的產品/工藝專屬性方法。 而在臨床II期后若是需要繼續(xù)使用商品化試劑盒,就需進行HCPs抗體覆蓋率驗證來評估試劑盒是否可以繼續(xù)用于質量監(jiān)控。通常推薦在臨床II期末或者臨床三期前的這個階段去做覆蓋率驗證,此時生產工藝已經固定并且有相對充足的時間。 圖2 USP <1132>產品開發(fā)的不同階段HCP檢測方法的建議 HCP覆蓋率驗證的不同技術路線 傳統(tǒng)的分析方法采用2D Western blot進行覆蓋率驗證,是基于等電點和分子量不同的原理,蛋白在凝膠上通過SDS-PAGE方法被分離。其中一張膠被銀染,另一張被轉到PVDF膜上,并結合ELISA試劑盒中的抗體進行Western Blotting檢測。但因其固有的方法學限制和技術挑戰(zhàn),往往難以全面、準確地評估多克隆抗體對HCPs的覆蓋范圍。 2D WB方法限制因素: 負載能力低 樣品經過前處理會破壞蛋白天然表位 HCPs結合到PVDF膜上導致?lián)p失部分檢測到的抗體信息 難以完全將PAGE凝膠與WB圖片對齊 特異性差,顯著低估真實抗體覆蓋率 為了克服這一難題,Cygnus Technologies于2014年創(chuàng)新性地推出了抗體親和提取(Antibody Affinity Extraction,AAE?)技術,目的是提高細胞培養(yǎng)收獲液中總HCPs混合物的靈敏度和覆蓋率評估,并可以檢測對下游工藝特異性HCPs的反應性,這些通常也是最為關注的HCPs。與2D-PAGE和2D-WB的靈敏度受負載能力等限制不同,AAE?的靈敏度可高出100倍以上,因為它能夠提取和濃縮大量樣品。 表 1 AAE與2D-WB覆蓋率技術路線對比 AAE 2D-WB 靈敏度 可富集mg級HCPs 靈敏度高(>95%) 因WB方法的局限性,覆蓋率被低估 靈敏度低(50-70%) 特異性 無變性處理特異性高(>99.5%) 抗原變性處理后特異性結合低(50-80%) 覆蓋率 AAE+2D-PAGE 60-90% AAE-MS 70-95% 50-70% 適用性 純化前和純化后均可 只是適合純化前樣品 AAE分析流程首先將多克隆抗體共價固定在色譜柱上。然后對色譜柱進行條件調節(jié),以防止抗體的顯著浸出并極大地減少任何非特異性結合。原始未變性的HCPs樣品通過色譜柱與抗體進行結合,隨后用酸洗脫。通過結合和洗脫,HCPs樣品再次在柱上循環(huán),直到沒有其他HCPs被結合。所有收集的HCPs洗脫液再匯集、交換緩沖液并濃縮回原始樣品體積,為后續(xù)的分析提供高質量的樣本。在收集到HCPs樣本后,可以選擇通過2D-PAGE+銀染或MS質譜進行后續(xù)分析。 圖3 USP <1132>產品開發(fā)的不同階段HCP檢測方法的建議 抗體對下游HCPs的反應性和AAE-MS?的HCPs鑒定 AAE?技術的優(yōu)勢不僅在于其高靈敏度,更在于其強大的預測能力和廣泛的應用前景。通過AAE-MS?獲得的覆蓋率的結果更高、更真實,可以更準確地預測抗HCPs抗體在ELISA中的表現(xiàn)。并且,AAE?與質譜聯(lián)用(AAE-MS?)能夠識別收獲材料中與抗體反應的HCPs,并獲得蛋白質的分子量和等電點(pI)信息,可以評估純化過程中持續(xù)存在的單個HCPs,并優(yōu)化下游純化工藝。 圖4 F650S HEK2 93抗體覆蓋率驗證 值得一提的是,AAE?技術在檢測并證明對單個下游HCP的反應性方面表現(xiàn)出色。更主要的是質譜可以對樣品中是否存在潛在高風險的HCPs做出鑒定并提供這些蛋白的注釋信息。通過AAE?技術,能夠更準確地識別和量化這些高風險HCPs。這些通過特定純化過程持續(xù)存在的高風險HCPs對于患者安全、藥物功效和穩(wěn)定性至關重要,無論是藥物研發(fā)人員還是監(jiān)管人員都能通過這一技術清楚地了解工藝中某個HCP的殘留情況,從而為藥物的研發(fā)和生產提供強有力的支持。 表 2 CHO細胞高風險HCPs 高風險蛋白(CHO) PRE F550 F550-1 pl MW 78 kDa glucose regulated protein (BiP,HSPA5) N Y Y 5.07 72379.1 Cathepsin B(CTSB) Y Y Y 5.73 35646.9 Cathepsin D Y Y Y 6.54 44110.9 Cathepsin E N N N 4.61 42726.4 Clusterin Y Y Y 5.58 51557.5 Glutathione S transferase P N Y Y 7.64 23638.2 Matrix Metalloproteinase 19 Y Y Y 7.71 58942 Monocyte chemoattractant protein 1(MCP-1) Y Y Y 9.32 15858.4 Peptidyl-prolyl cis-trans isomerase Y Y Y 9.59 23634.4 …. AAE-MS?在藥物原液和過程樣品監(jiān)控中的應用 AAE-MS?也可以對藥物原液中HCPs富集的同時去除了大部分原料藥。去除原料藥極大地提高了通過2D-PAGE和質譜分析識別單個HCPs的能力,因為藥品通常以104-106的倍數(shù)掩蓋HCPs。AAE-MS?是一種更客觀和直接的方法檢測和鑒定原料藥中任何潛在的HCPs雜質以幫助優(yōu)化下游純化工藝。 圖5 AAE對藥物原液中HCPs的富集 圖6 AAE-MS?對藥物原液中高風險HCPs的富集和鑒定總之,抗體親和提取(AAE?)技術以其卓越的性能和廣泛的應用前景,正在逐步成為生物制藥領域HCPs分析的新標準。它不僅能夠克服傳統(tǒng)方法的局限性,更在靈敏度、預測能力和應用深度上實現(xiàn)了顯著提升。隨著技術的不斷發(fā)展和完善,相信AAE?將在未來為更多藥物的研發(fā)和生產貢獻力量,為患者帶來更加安全、有效的治療方案助力。 支持文獻 [1] USP <1132> Residual Host Cell Protein Measurement in Biopharmaceuticals. [2] USP <1132.1> Residual Host Cell Protein Measurement in Biopharmaceuticals by Mass Spectrometry. [3] EP-2.6.34. Host-Cell Protein Assays. [4] Host Cell Protein Analysis: Immunoassays and Orthogonal Characterization By Antibody Affinity Extraction and Mass Spectrometry Methods [5] Antibody Affinity Extraction (AAE?) - A superior alternative to 2D Western blot for determination of polyclonal anti-HCP reactivity. [6] Antibody Affinity Extraction (AAE?) Empowers HCP Identification by Mass Spectrometry. 更多>

熒光標記二抗種類繁多,如何選擇?

一般來講,偶聯(lián)到二抗上的探針主要有酶(辣根過氧化酶HRP和堿性磷酸酶AP或其衍生物APAAP,PAP),熒光基團(FITC, RRX, TR, PE, Rhodamine)和生物素。選用哪種探針的二抗主要取決于具體的實驗,對于Western Blot和ELISA,最常用的二抗是酶標二抗;而細胞或組織標記實驗(細胞免疫化學,組織免疫化學,流式細胞術)中通常使用熒光標記的二抗。如果想要更大程度的放大檢測信號,可以使Biotin/Avidin檢測系統(tǒng)。其中熒光素是具有光致熒光特性的染料,熒光染料種類很多,目前常用于熒光標記二抗的主要有以下幾種: 異硫氰酸熒光素-Fluorescein Isothiocyanate (FITC) FITC純品為黃色或橙黃色結晶粉末,易溶于水和酒精溶劑。FITC分子量為389.4,最大吸收光波長為490~495nm,最大發(fā)射光波長為520~530nm,呈現(xiàn)明亮的黃綠色熒光。FITC在冷暗干燥處可保存多年,是目前應用最廣泛的熒光素。由于FITC是小分子化合物,每一個抗體可標記幾個FITC分子,IgM通常用小分子的熒光素標記,如FITC、Cy3/5、Texas Red等。FITC熒光二抗主要優(yōu)點是人眼對黃綠色較為敏感,通常切片標本中的綠色熒光少于紅色。然而FITC的缺點是淬滅快,因此要和抗淬滅劑一起使用。 四甲基異硫氰酸羅丹明-Tetramethyl Rhodamin Isothiocyanate(TRITC),Rhodamine Red-X(RRX), Texas Red(TR) 這些羅丹明的衍生物耦聯(lián)基團具有不同的吸收波長 (550, 570, 596nm)和最大發(fā)射波長(570, 590, 620nm)。在使用裝有氪氬燈的激光共聚焦掃描顯微鏡作三標記的實驗時,RRX尤其有用,可以和Cy2(或者FITC)和Cy5一起使用,因為RRX的發(fā)射波長在Cy2和Cy5中間,而且和這兩者覆蓋都很少,氪氬燈激發(fā)光為488nm,598nm和647nm,分別是Cy2(FITC), RRX和Cy5的理想激發(fā)波長。因為FITC和PE可以被氬燈的488nm波長激發(fā), 在流式細胞儀中用FITC作雙標,另一種用藻紅蛋白(PE)耦聯(lián)基團要比羅丹明好。TRITC為羅丹明的衍生物,呈紫紅色粉末,較穩(wěn)定,最大吸收光波長為 550nm,最大發(fā)射光波長為620nm,呈現(xiàn)橙紅色熒光,與FITC的綠色熒光對比鮮明,可配合用于雙重標記或對比染色。因TRITC熒光淬滅慢,也可用于單獨標記染色。 菁類染料-Cyanine dyes(Cy2, Cy3, Cy5) Cy2耦聯(lián)基團激發(fā)波長為492nm,發(fā)光波長為510nm的綠色可見光。Cy2和FITC使用相同的濾波片。由于Cy2比FITC在光下更穩(wěn)定,要避免使用含有磷酸化的苯二胺的封片劑,因為這種抗淬滅劑和Cy2反應,在染色片儲存后會導致熒光微弱和擴散。Cy3和Cy5比其他的熒光團探針要更亮,更穩(wěn)定,背景更弱。Cy3耦聯(lián)基團激發(fā)光的最大波長為550nm,最強發(fā)射光為570nm。因為激發(fā)光和發(fā)射光波長很接近TRITC, 在熒光顯微鏡中,可使用和TRITC一樣的濾波片。Cy3在氬光燈(514nm或528nm)下可以被激發(fā)出50%的光強,在氦氖燈(543nm)或者汞燈(546nm)下則約75%。Cy3可以和熒光素一起作雙標。Cy3還可以和Cy5一起在共聚焦顯微鏡實驗中作多標記。Cy5耦聯(lián)基團的激發(fā)波長最大650nm,發(fā)光波長最大670nm。在氪氬燈(647nm)下它們可被激發(fā)出98%的熒光,在氦氖燈下(633nm)為63%。Cy5可以和很多其他的熒光基團一起用在多標記的實驗中。由于它的最大發(fā)射波長在670nm,Cy5很難用裸眼觀察,而且不能用汞燈作理想的激發(fā)。通常觀察Cy5時采用具有合適激發(fā)光和遠紅外檢測器的共聚焦顯微鏡,在水相封片劑中應當加入抗淬滅劑。使用傳統(tǒng)的表面熒光顯微鏡時,不推薦使用Cy5。注:由于觀察熒光需要一定波長的激發(fā)光,必須根據(jù)實驗室已有的儀器可發(fā)光的波段進行選擇。另外注意多標記中對探針色彩區(qū)分程度的要求,例如,若丹明紅-X (RRX)和德克薩斯紅(TR)熒光素的區(qū)別就比四甲基若丹明(TRITC)或者Cy3的區(qū)別明顯。如果對靈敏度有更高的要求,則Cy3和Cy5就比其他的熒光團探針要亮。 西美杰代理的全球知名二抗和底物生產廠商LGC·Seracare·KPL提供豐富的熒光標記二抗,可檢測抗人、大鼠、小鼠、豬、驢、綿羊、山羊、小雞、馬、兔、倉鼠、狗、牛,以及多種細菌類等物種;另外,還有IgG、IgA、IgM以及IgG(Fc)、IgG(ab’)2等不同類型抗體。小編下面匯總了部分常用熒光二抗:FITCTRITCCy3Cy5抗人5230-02885230-0288-5230-0370抗小鼠5230-04275230-03365230-03645230-0376抗兔5230-02985230-03325230-03595230-0372抗山羊5230-0294-5230-03585230-0371抗綿羊5230-0324---抗雞5230-0325--5230-0379抗鴨5230-0326---抗狗5230-0314---抗貓5230-0317---鏈霉親和素5270-0028 -5270-0022 -注:表格數(shù)字部分為產品貨號如對西美杰代理的LGC·Seracare·KPL產品感興趣歡迎撥打西美杰客服熱線400-050-4006或登錄官方網站www.fushunwax.com.cn了解更多信息。 更多>

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